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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量加标回收率偏低

  • Ins_0344faa5
    2021/10/22
  • 私聊

化学试剂

  • 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量加标回收率在80%左右,怎么做都升不上去,请大神指教有可能的原因,样品是β环糊精,蛋白质含量在0.2%左右
    +关注 私聊
  • mingxiaoyan

    第1楼2021/10/22

    考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时,准确度是由一定范围的,浓度超出范围肯定不准。高浓度和低浓度回收效率也是有一定范围的,最佳回收效率也是在适当浓度下。
    注意事项

    在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收,因为在这段时间内颜色是最稳定的。

    测定中,蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。

    利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用,重复测定吸光度时,比色杯一定要冲洗干净,制作蛋白标准曲线的时候,蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定,防止误差。

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  • Ins_0344faa5

    第2楼2021/10/22

    加标都是在曲线范围内的,每次测定后也都会用乙醇将比色皿用乙醇洗干净,但是回收率就是怎么做都不高

    mingxiaoyan(mingxiaoyan) 发表:考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时,准确度是由一定范围的,浓度超出范围肯定不准。高浓度和低浓度回收效率也是有一定范围的,最佳回收效率也是在适当浓度下。
    注意事项

    在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收,因为在这段时间内颜色是最稳定的。

    测定中,蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。

    利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用,重复测定吸光度时,比色杯一定要冲洗干净,制作蛋白标准曲线的时候,蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定,防止误差。

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