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Aglent 1260 RRLC-QQQ 液质联用仪操作程序

  • memory光阴
    2021/11/30
    菜鸟分析队
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 1.目的

    建立一个文件以规范Agilent 1200/1260 RRLC-6430/6460 QQQ 液质联用仪的操作过程。

    2.范围

    适用于Agilent 1200/1260 RRLC-6430/6460 QQQ 液质联用仪。

    3. 操作程序

    3.1 开机

    3.1.1 确认氮气和高纯氮气供应,调节液氮罐的输出压力为 0.56-0.69MPa(80-100psi),调节高纯氮气钢瓶减压表输出压力小于 0.2 MPa (一般为约0.15MPa 或 10-30Psi)。同时确认前级泵的气镇阀处于关闭状态。

    3.1.2 准备LC流动相。检查管线连接状态。

    3.1.3 打开计算机,进入Windows Vista系统。

    3.1.4 打开 QQQ的电源开关(左下角),此时听到一声电磁阀的声音,前级泵启动,然后涡轮泵开始工作,打开 LC1200/1260各电源开关,等待大概2min后,质谱初始化完毕。

    3.1.5 执行 Start—Programs-Accessories—Command Prompt打开 Dos提示符,输入命令

    Ping 192.168.254.11(LC) 和192.168.254.12 (MSMS),如下图观察是否电脑与液相和质谱通讯正常(注:此步骤非必须)。



    3.1.6 如果结果显示通讯正常,回到桌面启动Data Acquisition图标,进入Masshunter工作站,并听到另外一声电磁阀的声音,表示仪器通讯正常。

    If it shows the connection is normal, then go back to the desktop and click Data Acquisition icon to enter into Masshunter work station. When you heard a voice of

    3.1.7 等待MS抽真空,当粗真空达到1.8~2.0 Torr,高真空达到3X10-5Torr的水平后,从Acquisition 切换到Tune界面,选择Autotune 对仪器进行调谐,保存调谐文件。

    3.2 数据采集方法编辑

    3.2.1 双击MassHunter数据采集图标,在 Acquisition界面,输入LC、MS相应参数,并保

    存方法。 LC参数主要包括:溶剂传输系统--泵,样品引入系统--自动进样器,样品冷却系统—冷却器,样品分离系统--色谱柱,控温系统--柱温箱。MS 参数主要包括:调谐文件的选择,MSD信号获取方式(MRM or MS2 SIM等),离子化模式正模式或负模式,离子源,母离子和子离子的选择。Fragmentor电压,碰撞能量,干燥气温度,干燥气流速,雾化气的压力,及毛细管电压的设置。

    3.2.2 在Worklist编辑界面点击左键,选择Add Multiple Samples,填写样品信息表格。转

    到Sample Position表格,选择样品被分析的位置,点击OK按钮。指定样品出现在Worklist,编辑样品名称、分析方法等选项,保存Worklist,按“Run Worklist”运行分析列表。

    3.3 数据定量分析方法编辑

    3.3.1 运行“Agilent MassHunter Quantitative Analysis” 软件,单击菜单项 File →New

    Batch,在新的批处理对话框,找到需处理数据的文件夹,输入批处理文件名并单击Open按钮创建一个新的批处理文件。

    3.3.2? 单击菜单项 File → Add Samples,在 Add Sample 对话框,单击选择来添加所需分

    析的样品。单击菜单 Method → New → New Method from Acquired MRM Data…用鼠

    标光标指向校正表中最高浓度的样品文件夹并选择“Open”按钮导入MRM方法采集信息。

    3.3.3 检查导入的用于MRM化合物设置的采集参数

    单击保留时间设置“ Retention Time Setup ”检查确认导入的参数(建议在样品分析时尽量按保留时间分组,以免干扰);单击方法设置任务 Method Setup Tasks→ ISTD,然后从下拉菜单“ISTD Compound Name”为每个目标化合物指定内标化合物(ISTD),并在ISTD Conc 列输入相应内标的浓度;单击方法设置任务Method Setup Tasks→ Concentration Setup,输入校正表中最高浓度(Dil. High Conc)以及稀释模式(Dil. Pattern),确认浓度级别名称(Level Name Prefix),然后选择创建级别(Create Levels),单击菜单然后复制校正级别到… Method → Copy Calibration Levels To…在复制校正级别对话框,单击选择所有(Select All)对话框,然后单击OK 按钮,关闭化合物信息窗口;单击方法设置任务Method Setup Tasks→ Qualifier Setup,检查限定离子设置(Check Qualifier Setup)参数,在导入MRM方法采集参数时限定离子参数应该自动产生; 单击方法设置任务-校正曲线设置 Method Setup Tasks→ Calibration Curve Setup, 检查每个目标化合物曲线拟合(Curve Fit)的缺省设置。

    3.3.4? 单击 Save/Exit→ Validate 验证方法设置,单击 Save/Exit→ Exit,然后选择Yes 应用方法到此批处理表。在工具栏上单击分析批处理(Analyze Batch)图标启动批处理分析。检查显示在批处理表( Batch Table)上的批处理分析结果,化合物信息和校正曲线显示在分析结果的下部。单击 File→ Save Batch,选择菜单Report → Generate,选择一个或多个模板(*.XLT files)生成报告,然后通过微软Excel打印报告。

    3.4 关闭仪器

    3.4.1 点击Data Aquisition,仪器控制界面,使泵、柱温箱、MS均处于“OFF”状态。

    3.4.2 点击MS QQQ图标,选择Vent(点击Vent前,确认前级泵气镇阀(Gas Blast Valve)处于关闭状态,以防返油造成系统内部严重污染,观察涡轮泵转速以及四极杆和干燥气的温度,等待大概20-30min 左右,等待涡轮泵转速完全停下来,且干燥气温度和四极杆温度下降到50以下,可能出现提示(视软件版本而异)。

    切记:关机前要确保机械泵的BALLAST阀是关闭的! 禁止用电源强行关机!

    3.4.3 关闭MassHunter软件,然后点击桌面Acq System Launcher 图标,然后选择Shutdown 关闭运行程序。关闭MS QQQ 和LC1200/1260 各模块电源开关。关闭计算机和显示器,关闭液氮罐开关阀。

    4. 仪器日常维护

    4.1 仪器定期维护

    4.1.1 每天:检查流动相体积,检查色谱柱的压力,检查气体压力。

    4.1.2 1-2天:清洁雾化室,移开高压网清洗绝缘体,用50%异丙醇冲洗电离室,用无尘布蘸取甲醇或50%异丙醇擦洗,清洗喷雾针并检查喷雾针位置。

    4.1.3 每周:检查粗真空泵油的液面及颜色,打开气镇阀约30分钟振气, 切记一定要关好。检查和清洗自动进样针。每6个月需要更换泵油。

    4.1.4 每周对仪器进行checktune

    4.1.5 调谐质谱:对于以下情况要进行Autotune:

    a. Checktune 不能通过;

    b.仪器初次开机或长时间关机状态后开机;

    c. 清洗了毛细管、skimmer、八极杆等光学组件或者移机时;

    d. 正常情况下,一月做一次Autotune,保存调谐文件。

    4.2 仪器必要维护

    4.2.1 观察到信号强度或稳定性降低时,需清洗或更换MSD中的毛细管,清洗或更换毛细管一定是在卸掉真空时操作。

    毛细管的清洗方法(注: 操作时要带无尘手套):

    a. 溶解1g Alconox 到100mL超纯水中;

    b. 用1mL的移液枪枪头套住毛细管两端保护金属涂层, 枪头剪到大约4 cm以便毛细管可以浸到溶液中;

    c. 将毛细管竖直放在100mL聚丙烯量筒中, 充满 Alconox溶液, 超声量筒大约10-15min;

    d. 用超纯水冲洗毛细管和量筒几次;

    e. 在量筒中充满超纯水,超声10-15分钟;

    f. 取出毛细管,移掉枪头( 如果有必要);

    g. 氮气吹掉毛细管中的水,待安装.

    4.2.2 如泵油液面下降至最低刻度以下则需加泵油;如泵油混浊或发黄则需将泵油倒出并倒入新的泵油,油液面不能超过最高刻度线。

    4.2.3 定期清洗溶剂过滤器(采用30-40%的硝酸浸泡1h后,超纯水冲净酸,溶剂吸滤头为陶瓷材质,不可超声清洗)。

    4.2.4 根据情况更换purge阀滤芯(Purge阀打开,设置纯水为流动相,流速5ml/min,压力超过10bar时需更换)。

    4.2.5 定期用酒精棉签擦拭针座,以防止灰尘污染堵塞针与针座。

    4.2.6 定期检查质谱仪六通阀前的在线过滤器,如颜色发黄、发暗需更换。

    4.2.7 定期检测器电子倍增管电压,如超过2000V需提前订购以备更换。

    5. 仪器使用环境

    5.1 正常使用温度范围15℃-30℃,允许使用温度范围4℃-35℃。

    5.2 允许使用湿度范围小于85%。
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  • symmacros

    第1楼2021/12/01

    应助达人

    完整细致的SOP,学习了。

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    +关注 私聊
  • hujiangtao

    第2楼2021/12/02

    应助达人

    有图片更形象

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