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【实战宝典】扩增产物跑胶条带弥散或拖尾的原因及建议措施?

  • 小官人-闭关修炼中
    2022/07/07
  • 私聊

PCR

  • 问题描述:扩增产物跑胶条带弥散或拖尾的原因及建议措施?
    解答:

    可能的原因有:

    1)制胶时要使胶完全融化。

    2)检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

    3)模板降解或过量,可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长,模板是 cDNA,要确认逆转录所用 RNA 的纯度及完整度,逆转录时不加随机引物重新逆转录。

    4)反应程序不够优化,退火温度不合适,可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度;尝试 Touch Down 程序。

    5)酶量加入过多。



    以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
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