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求问,液相色谱柱在Q-TOF使用前后的操作流程

液质联用(LCMS)

  • 液相色谱柱:Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 3.0×100 mm, 2.7 um,在Q-TOF上使用。试验前换上流动相及色谱柱的正确流程是什么?试验结束后,换下流动相及色谱柱的流程是什么?请教各位为小白解答。谢谢!

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  • wuyuzegang

    第1楼2022/07/20

    应助达人

    安装流程:取A管路放入流动相瓶中→ 拧松泵头 → 流速由0ml/min逐渐升至10ml/min,观察尾液是否呈瀑布状流出(持续10秒) → 拧紧泵头 → 流动相呈抛射状从安装色谱柱的一端喷出(观测是否呈抛物线状,持续5秒) → 流速逐步降至1.0ml/min →安装色谱柱,待20秒后,流动相从色谱柱另一端呈泉水状涌出再安装另一端→ 手握两端螺丝帽,拧紧。


    以上安装顺序遵循的是:逐级排放气泡和仪器内存留的洗液。

    拆卸:先用95%乙腈+5%水冲洗柱子(冲去柱子中残留的缓冲盐和之前难以洗脱的组分),关掉流速,待流速降至0后,把柱子两边的PEAK头拧下来,用配套的塞子将换下的柱子两头堵上,密封保存。

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  • hujiangtao

    第2楼2022/07/20

    应助达人

    色谱柱安装时需要注意安装方向,箭头方向即为流动相流动方向;选择合适的不锈钢或PEEK接头,色谱柱两端用接头拧紧,不要漏液;如果是新柱子液相色谱柱安装完成后可以先用纯有机相低流速进行冲洗(另一端管路直接进废液),然后再投入使用。

    完成样品检测后如果使用的流动相不涉及缓冲盐、有机酸或无机酸等添加物,可以直接用纯有机相进行冲洗,并将液相色谱柱内充满有机相并封存;如果使用的流动相中含有缓冲盐、有机酸或无机酸等添加物,则需用高比例的水相(如甲醇:水=9010)冲洗液相色谱柱30min以上,然后用纯有机相冲洗液相色谱柱,并将液相色谱柱内充满有机相并封存。

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  • 通标小菜鸟

    第3楼2022/07/20

    应助达人

    首先要选对流动相,选择的流动相不能对色谱柱有损伤。试验前需要配制好流动相,将流动相转移至流动相瓶中。色谱柱安装到柱温箱中,安装的时候注意箭头方向跟流动相流动方向一致,安装好后开启泵,确保色谱柱接口和出口端拧紧不漏液。如果色谱柱是新的还要用流动相进行活化处理。活化完成系统稳定就可以走样品了,测试完样品后要充分用流动相冲洗管路中的样品残留。如果后续长时间不做样,需要将色谱柱先用高比例有机相冲洗,然后拆下保存。两头用堵头堵住

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