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义翘神州稳定细胞株构建平台流程及常见问题解析

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2023/08/29

生命科学仪器综合讨论

稳定细胞株可组成型表达外源基因。因其稳定性高，适用于各种研究应用，包括重组蛋白、抗体生产、结构生物学和功能性研究等。

义翘神州在重组表达方面不断深耕，积累了大量稳定株开发的相关经验，在提高稳定细胞株的生产能力，改善稳定细胞株的细胞状态等方面有着丰富的经验。义翘神州可提供从基因合成到稳定细胞株交付的一站式服务，为客户的研究提供助力。

义翘神州拥有GS系统和可用于药品申报的整套系统，能够完成各类稳定细胞株的开发筛选工作。稳定株的开发首先是将外源基因导入宿主细胞，随后通过抗性基因进行筛选，得到稳定表达目的基因的细胞株。从转染后的细胞池中挑选优质克隆，通过测定目标蛋白的表达情况筛选大的细胞群，以发现高亲和力或高产量的细胞。

稳定细胞株重组表达流程图：

稳定细胞株构建平台常见问题解析：

①若想做稳定细胞株，需提供哪些信息？

客户仅需提供目标蛋白的序列信息和希望表达的目标蛋白的区段，义翘神州技术人员会根据客户要求进行表达风险评估和制定表达纯化策略。常见蛋白序列信息来源包括UniProt和NCBI等数据库。客户也可直接提供编码目标蛋白的核苷酸序列。

②稳定株细胞如何交付？

采用干冰运输，尽可能减少温度波动对细胞造成的影响。

③单克隆和pool怎么选择？

成药蛋白需要单克隆，以便溯源。如只需拿到蛋白/抗体的话，pool即可满足。需要提醒的是，通常情况下，pool产量较单克隆低。

④稳定细胞株做重组蛋白，能否根据蛋白活性进行克隆筛选？

是可以的，只要客户有完整的活性检测方法，我们可以提供minipool供客户进行活性检测（或由义翘进行活性检测）。符合客户对活性的要求后再进行后续的实验。

⑤为什么要构建稳定细胞株？

稳定株一个很大的优势是减小重组表达蛋白的批间差异，并且表达量通常比瞬转高。对于成药性抗体来说，构建稳定细胞株是十分必要的。

⑥为什么稳定细胞株构建周期较长？

稳定株的构建周期长，很大程度是由于要筛选出阳性克隆，并需要对细胞株的稳定性进行检测。

⑦制备稳定株表达蛋白的周期大致如何？

如只需要pool即可，从基因合成到得到纯化后的蛋白，周期一般在7周左右。如需引入多步纯化方案，标签切除，以及额外检测服务则周期会根据具体项目情况有所延长。

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