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酶标仪如何应用在实验检测中

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2023/08/31

环境监测政策法规

　　酶标仪(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)是一种常用于生物化学和免疫学实验中的分析技术，用于检测特定蛋白质、抗体、荷尔蒙、病毒等生物分子的存在和浓度。ELISA技术在医学诊断、生物研究和生物制药等领域具有广泛的应用。以下是酶标仪在实验检测中的应用步骤：

　　涂覆固相：首先，在酶标板(通常是96孔板)的孔中涂覆特定的抗体或抗原，用来捕获待检测的目标分子。这些抗体或抗原会与目标分子发生特异性的结合。

　　样本加入：添加待检样本，样本中的目标分子会与涂覆在固相上的抗体或抗原结合。

　　洗涤：通过多次的洗涤步骤，将非特异性的物质从孔中洗去，以减少干扰。

　　探针加入：添加与目标分子特异性结合的标记有酶的二抗或其他分子，用来检测样本中目标分子的存在。这个标记有酶的分子可以是辣根过氧化物酶(HRP)等。

　　洗涤：再次进行洗涤步骤，去除未结合的分子。

　　底物添加：添加一种底物，该底物可以被标记有酶的分子催化，产生可量化的信号。最常用的底物是TMB(3,3',5,5'-四甲基苯基二噻唑啉-2,2'-联苯胺)底物，其在酶作用下会变成蓝色产物。

　　反应终止：通过加入停止反应的溶液，终止底物的变化，将反应的颜色固定。

　　测量：使用酶标仪测量每个孔的吸光度，测量结果与目标分子的浓度呈正相关关系。通常会构建一个标准曲线，通过已知浓度的标准样品，将吸光度值转化为目标分子的浓度。

　　数据分析：根据标准曲线和样本的吸光度值，计算出样本中目标分子的浓度。

　　酶标仪技术有不同的变种，例如直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等，用于不同类型的分析需求。这种技术的优势在于其高灵敏度、高特异性和相对简便的操作流程，使其在医学诊断、药物开发、生物学研究等领域得到广泛应用。

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