液相色谱方法开发问题

回收实验室淘汰下来的各种二手色谱耗材、配件、手动进样阀、仪器QQ292990861。

应助达人

1、方法开发的前期流动相尽量越简单越好，先摸索初步方法，后续根据实际情况再优化；
2、可以溶解在四氢呋喃中，但甲醇中溶解度极低，楼主有试过用乙腈溶解吗？或者THF&Methanol或者THF与ACN混合溶剂。综合考虑选择稀释溶剂，而且液相开发的溶剂选择一般尽量与使用的流动相保持一致或者接近。（THF可以作为流动相）
3、色谱柱填料孔径80A、95A、120A？选哪个更好？由于楼主是三种物质，使用需要考虑分离度的因素，所以一开始建议就用80A的，柱效会更好一点。
4、色谱柱的PH值范围2~8够用吗？需要选择2~11的吗？从化合物分子结构来看，2~8够用了。
5、这三种目标物都不溶于水，那流动相中能用有机相和水做梯度洗脱吗？如果这三种物质在水中溶解度很差，那不建议用水，因为流动相梯度比例变化很容易造成目标物析出，然后残留在柱内部。

应助达人

我觉得100%甲醇或乙腈作流动相，普通c18柱应该可以较好分离。