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T细胞培养的原理及方法:探索细胞因子在免疫反应中的关键作用
Ins_bf0c01c3
2024/01/31
私聊
生命科学仪器综合讨论
T
细胞培养
是指在体外模拟体内环境,使
T
细胞能够生存、生长和繁殖的一种技术。在
T
细胞培养中,细胞被置于无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件的环境中,以保持其活力和功能。
T
细胞培养被广泛应用于免疫学、生物医学和药物研发等领域,是研究
T
细胞功能、探索免疫反应机制的重要手段。通过
T
细胞培养,科学家可以观察和分析
T
细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞因子分泌等过程,了解其在免疫应答中的作用。同时,
T
细胞培养也为疾病治疗和预防提供了新的思路和手段,如免疫疗法、疫苗研发和细胞治疗等。
T
细胞培养的原理
是通过复合抗体孵育标记脾脏细胞中除
T
细胞以外的其他细胞,再用磁珠结合抗体,然后用磁极吸附磁珠,那剩下的就是没有结合磁珠的
T
细胞了。
t
细胞培养方法包括以下步骤:
①抗体包被培养板:用无菌
PBS
制备
5~10 μg/mL
的
CD3
抗体,然后在
96
孔板的条件孔中,每孔加入
50 μL
抗体溶液。
②接种细胞:在抗体包被的培养板中接种
T
细胞,然后将培养板置于
37
℃培养箱中
2
小时或者提前一天准备培养板,置于
4
℃过夜。
③洗涤和消化:在接种细胞之前,用
移液枪
将培养孔中的
50 μL
抗体吸出,然后用
200 μL PBS
洗涤培养孔并弃去
PBS
。重复此步骤以去除所有未交联的抗体。
④细胞消化:将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入
1ml
的
PBS+EDTA
(
0.02%
),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入
10mlMEM
,混匀,不能吹打,分装
2
瓶。如果细胞没长满就脱落,则只需加入
5mlMEM
,不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到
80
%以上,吸走培养基,加入
5ml
的
PBS+EDTA
(
0.02%
),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入
1ml0.05%
胰酶,
37
度消化不超过
3min
,细胞完全消化脱壁,取出加入
10ml
培养基轻微吸打混匀,分装
2
瓶。
⑤培养:将分装的
T
细胞接种到新培养瓶中,通常
T25
加
10~12ml
培养基培养,
2~3
天左右换液一次,若培养基变黄及时换液,以维持一个相对稳定的培养条件,有利于细胞活正常生长。
不管是我们实验室中常规的细胞培养,还是临床上的
CAR-T
细胞治疗等,提高
T
细胞的增殖和持久性,以及增强细胞再免疫抑制性
TME
中的功能,都离不开细胞因子。
细胞因子是由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、
T
细胞、
B
细胞、
NK
细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、
APSC
多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。
细胞因子可被分为白细胞介素
(IL)
、干扰素
(IFN)
、肿瘤坏死因子
(TNF)
、集落刺激因子
(CSF)
、趋化因子、生长因子
(GF)
等。
细胞因子
γ链共受体家族包括
IL-2
、
IL-4
、
IL-7
、
IL-9
、
IL-15
和
IL-21
,它们在
T
细胞分化、增殖和内环境稳定中起着关键作用。他们受体包括共同的γ链(γ
c
)和一个各自单独的受体链,下游信号激活
STAT
信号通路。
更多
细胞因子
详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/resource/featured-review/t-cell-culture-cytokines-treatment
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