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分析方法开发的小心得

  • Insm_603a714c
    2024/05/19
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 16年开始参加工作,一致在药企做QC,HPLC GC AAS UV IR能用到的都挺熟悉
    去年被裁,碰巧安捷伦仪器工程师介绍了一个初创公司
    遂入职,入行工艺分析研究,主要工作内容是医药中间体的分析方法开发和样品检测
    如何快速的进行HPLC方法开发
    HPLC标准梯度A0.1%磷酸B乙腈 5%B-95%B标准梯度,结合色谱柱规格,确定梯度变化速率和流速
    如100*2.1mm的色谱柱,梯度变化为10分钟,流速为0.5ml/min
    时间B%
    05
    0.55
    10.595
    11.595
    125
    13.55
    这样就得到一个通用方法,然后根据峰的分离情况,目标化合物的结构,优化梯度,筛选色谱柱,选择流动相等
    这时,峰在保留时间越小极性越大,保留时间0.5-1min,出峰靠前,说明化合物极性极大,需要增加流动相极性(增加水相比例,但常规C18水相比例最高为95%),增加色谱柱极性(换极性键合c18柱,如AQ-C18,T3等)
    保留时间12-13.5说明化合物极性极小,出峰靠后,说明化合物极性极大,需要降低流动相极性,(增加有机相比例或者95%B的时间或者增加有机相洗脱强度,如将95%B的保持时间增加到3min),降低色谱柱非极性(换保留更弱的C18或C8 C4等)
    两个或者多个峰都出在中间,分离不佳,可以降低有机相变化速率和初始有机相比例来优化,都无效果就需要换柱子和流动相了
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  • yy_0324

    第1楼2024/05/20

    "分析方法开发的小心得"!这是前进中经验的积累。

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  • sunny9898

    第2楼2024/05/21

    谢谢楼主分享,非常实用的总结

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  • Insm_603a714c

    第3楼2024/06/10

    2,如何优化方法
    在通用方法上改边梯度无法分离的化合物,看下化合物结构,有酸碱性基团的可以用marvinsketch 算下logD,两个化合物logD,大于-1且相差较大时,使用该pH分离会非常容易;也可直接改变水相pH 分别为 5 7 9(注意色谱柱耐受范围),观察分离情况
    都为中性化合物,需要筛选色谱柱,一般筛C18 PFP 苯基己基柱即可
    也可参考其他各公司的说明书来筛pH和色谱柱

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  • dadgoh

    第4楼2024/06/10

    应助达人

    液相色谱分析一般都需要一个优化过程,以获得理想的分析结果。

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  • Insm_603a714c

    第5楼2024/07/20

    3,结构类似物,异构体的分离
    固定相首选苯己基,有机相选择甲醇,五氟苯基柱对于极性基团取代的位置异构体分离有奇效。
    甲醇等作为质子型溶剂,对异构体的分离有着非常好的效果

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  • dadgoh

    第6楼2024/07/21

    应助达人

    作者分享的实战经验很好。

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