胖丁丁
第14楼2008/05/27
(今天可算是写完了报告。。。。压抑了千万句想抱怨的话。。。)
关于“模拟食物中毒样品”检测的技术报告
2008年4月,收到了广东省CDC下发的考核样品,是一个模拟食物中毒样品,样品编号为ILC5a-009,样品名称为食物中毒样品;要求检测的项目是氯氰菊酯,甲胺磷,久效磷,毒鼠强,敌鼠钠盐。
收到样品后,需要判断样品的基质,即样品是有机试剂为主体,还是以水溶液为主体。打开装样品的塑料瓶,观察样品样品状态,发现是褐色溶液。用鼻子小心地嗅一下,没有闻到比较强烈的异味,再吸取一滴样品溶液滴在手背上,也没有发觉常见的有机试剂造成的皮肤刺痛感觉。这时可以比较倾向认为样品主要是用水溶液配制而成。
取样品用二氯甲烷按1:1体积萃取,在气质联用仪上用SCAN模式进行检测,发现峰很杂,而其中一个最大的峰经检索的结果显示是咖啡因,再考虑此样品呈现的体育事业糖色,由此推断此样品是用可乐配制。
针对样品的基质是水的特点,再根据这几个项目的特性,设计4 类不同的检测方法。
(1)甲胺磷和久效磷:属于水溶性有机磷农药,用二氯甲烷进行萃取,在氮吹仪上浓缩后,用带FPD检测器的气相色谱仪进行检测。
(2)氯氰菊酯:属于脂溶性有机氯农药,可以用石油醚进行萃取,在氮吹仪上浓缩后,用带ECD检测器的气相色谱仪进行检测。
(3)毒鼠强:用乙酸乙酯进行萃取,在氮吹仪上浓缩后,用气质联用仪进行检测。
(4)敌鼠钠盐:常用的方法为三氯化铁显色化学法。
下面是具体的实验仪器参数及内容:
(1)有机磷农药实验
仪器:Agilent7890(US10717005) 气相色谱仪
色谱柱:兰化所农残二号柱(30米0.53内径)
柱温:起始100℃,保持3min,再以每分钟40℃的速率升温至230℃,保持4min.
检测器:FPD。
进样口温度:250 ℃
检测器温度: 250 ℃
定性依据:保留时间和峰形。
实验结果:甲胺磷和久效磷标准出峰时间为5.119min及6.850min,样品浓缩液中能找到在此保留时间的出峰,且峰形吻合,分别见图1 至图4 。
(2)有机氯农药实验
仪器:Agilent7890(US10717005) 气相色谱仪
色谱柱:DB1701柱(30米0.53内径)。
柱温: 起始温度100 ℃ ,保持2min,再以每分钟25℃的速率升至 270℃,保持6min。
检测器:ECD。
进样口温度:250℃
检测器温度: 250℃
定性依据:保留时间和峰形。
实验结果:氯氰菊酯的四个异构体出峰时间为18.9min及21.2min之间,样品中也能见到比较特征的四个异构体,且保留时间、峰形吻合,分别见图5至图6 。
(3)毒鼠强实验
仪器:岛津QP5050A(C11153601226KG) 气质联用色谱仪
色谱柱:DB-5柱(30米0.25内径)。
柱温: 起始温度80 ℃ ,保持5min,再以每分钟30℃的速率升至 280℃,保持15min。
柱流量:1.1ml/min,分流比10:1,柱前压72.3
检测器:MSD
进样口温度:250℃
质谱接口温度: 250℃
定性依据:保留时间和离子丰度比例,如果检出浓度较高需要得到全扫描的谱图并检索出现应结果。
选择离子:132,212,240
实验结果:毒鼠强的出峰时间为11.29min(见图7),样品在此时间时间未出明显峰形。(见图8)
(4)敌鼠钠盐实验
三氯化铁显色化学法的结果显示为阳性。
通过查找文献资料,希望能找到其它定性方法,发现关于敌鼠的检测基本上是化学法为主,只找到了一篇液相方法,一篇气质联用方法。由于液相方法及液相检测器特异性较低,因此考虑建立气质方法。
在检测毒鼠强的仪器方法基础上,不修改其它仪器参数,仅仅修改选择离子(132,212,240)为340和173,用SIM方式进行扫描,发现在18.3min和21.2min均出现较大峰(见图9)。于是再用全扫描方式进行检测,对21.1min 出和峰进行谱质检索,发现此时的质谱图不仅有340和173,还有特征的265和89,(见图10)且谱图与文献中敌鼠的标准谱图相近,因此更能确定有敌鼠的存在。
确定同时检测毒鼠强和敌鼠气质方法如下:
仪器:岛津QP5050A(C11153601226KG) 气质联用色谱仪
色谱柱:DB-5柱(30米0.25内径)。
柱温: 起始温度80 ℃ ,保持5min,再以每分钟30℃的速率升至 280℃,保持15min。
柱流量:1.1ml/min,分流比10:1,柱前压72.3
检测器:MSD
进样口温度:250℃
质谱接口温度: 250℃
定性依据:保留时间和离子丰度比例,如果检出浓度较高需要得到全扫描的谱图并检索出现应结果。
溶剂延迟:6 min
选择离子:第一组: 6-15min,选择132,212和240,
第二组:15-26min,选择340和173。
样品处理:取样品加入无水硫酸钠,再以乙酸乙酯进行萃取,在氮吹仪上浓缩后,用气质联用仪进行检测,可以同时检测检测毒鼠强和敌鼠。
在完成气质联用(GC-MS)的方法后,继续进行液质联用法(LC-MS-MS)检测敌鼠的方法研究。在Q1阶段,能找到敌鼠的加氢分子量峰(341),见图11和12。
再针对341的分子量做产物离子分析,得到178.1,217.0,188.9,207.1,276.2的特征碎片离子(见图13)。针对以上离子,做MRM的参数优化,最后的结果表见表1。
表1 LC-MS-MS检测敌鼠的MRM表
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母离子 子离子 CE DP FP EP CXP
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341.0 178.1 63 42 400 8 11
341.0 217.0 37 37 400 8 14
341.0 188.9 67 43 400 8 12
341.0 207.1 40 37 400 8 13
341.0 276.2 60 40 400 8 16
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最后结论:此样品(样品编号为ILC5a-009,样品名称为食物中毒样品)检出氯氰菊酯,甲胺磷,久效磷,敌鼠钠盐,未检出毒鼠强。