梯度洗脱 一定要注意 冲洗柱子的时候看看 你用的是什么流动相！
如果是缓冲盐的化 一定要用水好好的把柱子冲一下
不要上去就用 梯度洗脱冲洗柱子
我的柱子 就被一个新手给毁了！

深切同情一下。。。
使用缓冲盐体系是需要注意切换时的过渡问题，大家引以为戒吧。
另外，在梯度洗脱中，即使不使用含盐的体系，也有可能出现梯度过程中两相不混溶的问题，导致带来的一系列异常情况的发生。所以应对各流路流动相性质作了解，注意溶解范围以及梯度进行的速率等情况。

小结：

1、注意各溶剂间的互溶性。
2、对溶剂的纯度要求更高（影响重现性）。
3、注意梯度变化时系统压力的变化，防止超出限度。
4、梯度结束后，用初始流动相冲洗，使柱子平衡一段时间（再生），使系统回复到初始状态。（梯度周期）
5、低压梯度要注意脱气，混合后容易产生气泡。
6、容易出现鬼峰，应作空白试验。
7、梯度选择时尽量几相之间相变化要小,否则不易平衡。
8、梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）。
9、要注意水相中盐的浓度，防止在有机相提升过程中盐的析出。