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第11楼2008/08/27
你认为影响质谱灵敏度的最主要因素有哪些?
如果仪器本身没有问题--没有污染,各部件都处于良好状态,我认为离子化效率是影响灵敏度的最直接因素。
具体有三个方面:样品(本身性质)及前处理(基质效应),液相条件(流动相比例、缓冲盐、PH……)和质谱条件(离子化模式,雾化气、干燥气温度和流量,毛细管电压,shield电压等)。
优化的目的就是使样品在保证分离的情况下尽好的离子化,当然质谱条件中一些参数是为了在尽量减小噪音的情况下把样品离子引入质量分析器,但是总体来讲,我认为离子化效率是影响灵敏度的主要因素。
问题:能否举个lc-ms样品前处理的实例——最好是食品、血液等比较复杂样品的——在这些样品中,基质效应很明显,前处理方法直接影响试验结果、甚至成败,所以比较感兴趣。
楼层已选
zhufangwei
第12楼2008/08/29
Determination of chloramphenicol residues in shrimps by liquid
chromatography–mass spectrometry
M. Ramos, P. Mun˜oz*, A. Aranda, I. Rodriguez, R. Diaz, J. Blanca
Sample extraction and clean-up
Ten grams of blended shrimps were weighed into a centrifuge tube of 100 ml, and 150 ml of the internal standard working solution of 5D-chloramphenicol and 40 ml of phosphate buffer were added.The tubes were introduced in an ultrasonic bath for about 15 min, centrifuged till separation of the sediment and the supernatant was filtered through a Millex filter. After conditioning a C cartridge with 5 ml of methanol and 5 ml of water, an aliquot of 30 ml ofthe filtered supernatant was gently pressed through the cartridge by means of a disposable syringe. The cartridge was then washed with 5 ml of water and 5 ml of a mixture of 5% acetonitrile in water. Chloramphenicol was eluted from the cartridge with 10 ml of 30% of acetonitrile in water in a 20-ml reagent tube, to which 2 ml of ethylacetate were added. The mixture was shaken and after separation the upper layer was transferred to a 10-ml tube and the extraction with ethylacetate was repeated twice. The combined organic phases were evaporated till dryness in a water bath at 50 8C under a gentle stream of nitrogen. The dry residue was dissolved in 300 ml of the HPLC mobile phase and 25 ml of this final extract were injected in the chromatographic system。
基质效应是不是很大我倒没有一个很深刻的概念,我是做兽药残留分析的,一般通过有机试剂提取,脱脂,净化过柱就差不多了。当然前处理做的越好方法就越好,前处理做的不好,不管是不是液质的方法,对什么仪器方法都会有影响。不知道说的对不对哈,敬请指点。
我的问题是你在使用液相质谱做检测方法的时候遇到过“残存效应”(比如进空白溶剂也会有峰,空白样也有峰等等诸如此类的现象),如果遇到了你是怎么解决的??
我选100楼吧,希望做人能够做成百分之一百成功,当然这只是一个愿望了
momomo
第13楼2008/09/21
回复12楼:
我曾经遇到空白残留的问题,困扰了我很久。感触有以下几条:
1.洗针水的影响。要经常注意洗针水是否充足。我的经历就是:在洗针水快完时没发现,结果进了几个高浓度的样品后,以下进的低浓度样品就出现了难以置信的很大的峰面积。洗针水对液质的影响比对一般液相的影响大很多很多。
2.进样体积的影响。这主要是对于高浓度样品来说。在连续进高浓度样品几针后,都要接着进一针甲醇,或甲醇水。因为高浓度样品容易残留。所谓高浓度样品对不同样品不同质谱有不同的规定,一般的1ug/ml的样品对质谱来说算是很高的了。
3.不同代测物的影响。有些物质容易残留在进样针或质谱里。我没作过多少样品。现在作的甲氨蝶呤就相对容易残留在进样针里头。一般很少残留在质谱里的。
........
所以在遇到空白有残留的时候,我一般是这么处理的:
1.排除这个空白在前处理过程中是否被污染。如进样枪污染,装样瓶未洗净等。
2.发现空白残留后,按代测物的性质加新的洗针水,如样品水溶性较大,则用甲醇水为洗针水,若脂溶性很大,则直接用甲醇。
3.或者在发现残留后,连续进甲醇或甲醇水,直到残留几乎没有,并在液相端进行洗针。
4.如果还不行,则将质谱和液相断开,用异丙醇为流动相,且用异丙醇装样,不断的进异丙醇洗针。记住,一定要断开质谱。
5.如果还不行,那么要么把进样针拆下来超声清洗要么检查是否坏了,这个基本本人不会。要请工程师出马。
6.还有就是停下手上的工作。让别人来用这个液质。只要你的残留对别人的检测没有影响。通过别人不断 的进样,就可以把残留冲洗干净。既可以节省时间也可以节省试剂,心情也好。我的残留就是在用异丙醇仍然不能解决之下给别人进了几百个样后冲干净了的。这招很灵。
我提的问题主要是我最近要解决的问题:
1.两性代测物,但水溶性更大一些,要用液质来测,大家怎样前处理这个血样,使得所进样品既干净又能有比较高的回收率?
2.对于测红细胞中药物的浓度,红细胞的介质效应非常大,使得回收率很低,大家怎样处理介质效应?
3.哪些试剂(包括流动相、前处理所用试剂)可以进液质?如甲醇、乙腈这些大家都知道了,可否作个总结?
这上面3个问题,挑感兴趣的答就行了。我选78楼。
yxh1026
第19楼2009/08/30
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我提的问题主要是我最近要解决的问题:
1.两性代测物,但水溶性更大一些,要用液质来测,大家怎样前处理这个血样,使得所进样品既干净又能有比较高的回收率?
2.对于测红细胞中药物的浓度,红细胞的介质效应非常大,使得回收率很低,大家怎样处理介质效应?
3.哪些试剂(包括流动相、前处理所用试剂)可以进液质?如甲醇、乙腈这些大家都知道了,可否作个总结?
这上面3个问题,挑感兴趣的答就行了。我选78楼。
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回答13楼第一个问题:
可以先加沉淀剂沉淀蛋白,离心,上清液调节ph值过离子交换固相萃取小柱净化,洗脱、定容检测,如果要有良好的回收率,条件允许可以使用同位素内标定量。
我的问题;一次实验的时候发现前面的样品跑的很正常,但后面的样品的灵敏度只是前面样品灵敏度的五分之一,为什么到现在也没想明白,我的仪器是Agilent1200-6410?
我选60楼