应助达人

翻译成氢氧化铵好像不妥，应该是氨水要好一点。

简介

1、 理论
用乙腈与水的混合物可以将肌肉组织中三聚氰胺萃取出来，萃取物利用液液萃取方式通过SPE用二氯甲烷净化。三聚氰胺使用5%的氨水/甲醇从SPE柱中洗脱，蒸发至干燥，用内标物与50%的乙腈/水重新稀释成原来的体积(乙腈与水的混合物的体积)，通过LC/MS/MS分析。
2、
适用范围
本方法适用于猪与禽肌肉组织中三聚氰胺含量≥50ppb的快速筛选。

redanqi 发表:请先翻译附件中文件的A与G部分，最终评分按翻译质量和数量分配,同时欢迎各位版友参与评译，参与者亦有积分

A. INTRODUCTION
1.
Theory
Melamine is extracted from muscle tissue with a mixture of acetonitrile and water. The extract is cleaned up by liquid/liquid extraction with methylene chloride followed by solid phase extraction (SPE). Melamine is eluted from the SPE cartridge with 5% ammonium hydroxide / methanol, evaporated to dryness, reconstituted with internal standard and 50% acetonitrile / water, and analyzed by LC/MS/MS.
2.
Applicability
This method is applicable for screening of melamine in swine and poultry muscle at ≥ 50 ppb.
v

G. 筛选标准
1.
保留时间与标准偏差必须在5%之内。
2.
三聚氰胺离子富集与标准偏差必须在20%之内。
例子演算：
三聚氰胺离子比率= (m/z 127到85峰面积) ÷ (m/z 127到68峰面积)
注：大多数质谱计算的是上式的倒数，并标记为百分比，也是同等有效的。
样品通过离子比率=标样的离子比率±(0.2 * 标样的离子比率)
3.溶剂空白，ACN:H2O(1:1，V/V),必须在标准曲线三聚氰胺完全检不出之后才注入（符合通过离子比率在保留时间段不出峰），并显示无残留。多数质谱仪计算相互在上面并且陈述它作为百分比，是相等地合法的。
4.
以保留时间和离子比率为确认标准。
5.
符合保留时间和离子比率标准的三聚氰胺峰面积必须与内标控制比较。
使用内标，内标峰面积(m/z 127到85)划分的峰面积的三聚氰胺量化(m/z 130到87)必须是小于或等于10%标准样品峰面积。
6. 为了定性分析或检测三聚氰胺含量<50ppb水平的样品。使用内标，内标峰面积(m/z 127到85)划分的高峰地区的三聚氰胺量化(m/z 130到87)必须是大于或等于标准样品峰面积。

这个太专业了．

氢氧化铵不就是氨水。

我最近也在做这个方法的实验，欢迎大家交流。
这是我在网上查的整篇的翻译稿，感觉红色部分翻译是否有错？感觉应该是保留水层才对吧？

A 介绍
1、原理
三聚氰胺用乙腈和水混合从肌肉组织提取，提取物通过与二氯甲烷液液交换，之后通过固相萃取柱净化，用5%氢氧化铵/甲醇溶液洗脱，蒸发干燥，和内标重溶50%乙腈/水溶液。通过LC/MS/MS(液相色谱/质谱/质谱)分析。
2、适用范围
本方法适用于甄选三聚氰胺含量大于等于50ppb得猪肉和家禽肉。
3、结构

B 设备
注意：以下所列，可用相当设备替换。
1、 器皿
a 分析天平，0.1mg灵敏度，型号味A120S，Sartorious公司
b 上皿式天平，0.01g灵敏度，Mettler公司
c 带15ml离心管的离心机，国际设备公司
d 带50ml离心管的离心机，同上
f 离心管 15ml玻璃，一次性，上端螺纹，Kimble公司，货号73785
g 离心管 玻璃，一次性，15ml，16×100mm，Kimble公司，货号73500 16100
h A类量筒，25ml，100ml，500ml
i 均质机
j 可调移液器，100ul~10ml，Eppendorf
k 1ml注射器
l 氮吹仪
m 巴斯德习惯
n 反复吸管-大容量液体移液器(repipetters-bottle top dispensers)，0~25ml和1~10ml有机型
o 混合气，水平震动，2速 Eberbach公司
p 固相萃取柱 Strata X-C, 60mg,，3ml，Phenomenex公司
q 药匙，不锈钢
r 注射瓶，Teflon涂层
s 3ml，一次性注射器
t 注射器过滤微孔滤膜，0.45um
u 试管架
v 真空多支管设备，固相萃取柱用
w A类容量瓶 50ml、1L
x 漩涡振荡器，可调速度
2、 设备
a HPLC Waters Alliance 2695
b 质谱，Waters 串联四级杆
c 色谱柱，Phenomenex SynergiTM 反相柱(150×4.6mm；4um粒径)
C 试剂和溶液
注意：下面所列试剂和溶液可被相当试剂替代。
1、试剂
a 乙酸，质谱纯
b 乙腈， 色谱纯
c 乙酸铵，质谱纯
d 氢氧化胺，30%
e 盐酸
f 甲醇，色谱纯
g 二氯甲烷，色谱纯
h 超纯水，10M欧姆。
2、溶液
a 乙腈水混合液，体积比1：1
b 冲洗溶液，乙腈和水各半，无需精确
d 1N HCl
d 0.1N HCl
e 5% 氢氧化胺甲醇溶液
f 流动相A（25mM乙酸铵/25mM乙酸溶于水中）：
D标准
注意：注意：下面所列试剂和溶液可被相当试剂替代。
1、 来源
a 三聚氰胺，货号M2659，Aldrich公司
b 15N3三聚氰胺（内标），货号IN5451,ICON服务
2、储备液
a 三聚氰胺储备液,100ug/ml
b三聚氰胺工作液,1ug/ml
c 15N3三聚氰胺内标
d 校正曲线
浓度 等同单位 三聚氰胺工作液（1ug/ml） 定容体积 稀释液，乙腈水溶液(1:1, V/V)
0ng/ml 0ppb 500ul 500ul 500ul
125ng/ml 25ppb 125ul 500ul 375ul
250ng/ml 50ppb 250ul 500ul 250ul
500ng/ml 100ppb 500ul 500ul 0ul
2、 储存和稳定性
储存于2-8℃，稳定性未测试
E 样品准备
肌肉样品取出多余脂肪后，切成小块，使用食品匀浆机粉碎。将粉碎样品转移到塑料袋中，储存在零下20℃。部分溶解样品优先分析。
F 分析程序
注意：避免塑料接触。
1、 肉样准备
a 称5.00±0.05g样本，放入50ml离心管中。同时做空白。
b 加入250ul的1ul/ml三聚氰胺工作液，作为50ppb的阳性对照。
c 加入25ml的乙腈水混合液(1:1, V/V)。
d 高速匀浆30s~60s。
e 3500r离心10分钟
f 吸取5ml的提取液到50ml玻璃离心管中
g 加110ul的1N的HCL，旋涡振荡混合
h 加10ml的二氯甲烷
i震荡2min
j 3500r离心10分钟，或静止分层
k，弃去上层水层
l 加2.5ml到50ml到上述管中
m震荡2分钟
n 3500r离心10min，或静止分层
o小心除去上层
p拧紧盖，旋涡振荡10s
q 3500r离心10分钟
r清洁spe用多支路萃取器
s用5m甲醇和水预洗SPE柱
t将样品加入SPE柱
u用0.1N的HCl 2ml，1ml甲醇洗柱，弃去清洗液
v 抽真空1min
w 用5ml，浓度5%得氢氧化胺/甲醇溶液淋洗柱子，收集淋洗液与试管中
x 清洗氮吹仪
y 50~60℃吹干
z 加入100ul的乙腈水溶液和100ul的内标工作液
aa 漩涡震荡样品，超声至少1min，以全部溶解残余物
bb 过0.45滤膜，放到样品瓶中，待测。
2、 仪器设置
注意：下面仪器参数可能是最优的。
a HPLC条件
Ⅰ 流动相A：25mM的乙酸铵/25mM的乙酸的水溶液
Ⅱ 流动相B：乙腈
Ⅲ 流动相C： 甲醇
Ⅳ 流速：0.5ml/ml
Ⅴ 梯度
时间，分钟 %A %B %C
0.0 80 15 5
5.0 30 65 5
5.1 5 90 5
7.0 5 90 5
7.1 80 15 5
12.0 80 15 5
Ⅵ 进样量：50ul
Ⅶ 柱温：25℃
b 接口条件
Ⅰ 极性：正
Ⅱ 离子源：EI
Ⅲ 源温度：125℃
Ⅳ 脱溶剂温度：450℃
Ⅴ进样锥气体流速：20L/hour
Ⅵ 脱溶剂气流速: 900L/hour
质谱多反应监测参数：
Ⅰ Resolution Q1 &Q3 Unit
Ⅱ 锥形电压： 35V
Ⅲ Dwell time: 0.2sec
Ⅳ 三聚氰胺跃迁：
(a) m/z 127→85 27eV碰撞电压
(b) m/z 127→68 17eV碰撞电压
Ⅴ 15N3三聚氰胺跃迁
(a) m/z 130→87 17eV碰撞电压
样品色谱图见原文

中文

A. INTRODUCTION
A.引言
1.
Theory 原理
Melamine is extracted from muscle tissue with a mixture of acetonitrile and water. 三聚氰胺是通过乙腈和水的混合物将其从肌肉组织中提取（分离）出来的。The extract is cleaned up by liquid/liquid extraction with methylene chloride followed by solid phase extraction (SPE). 提取液先用二氯甲烷液液提取，然后再用固相萃取来净化。Melamine is eluted from the SPE cartridge with 5% ammonium hydroxide / methanol, evaporated to dryness, reconstituted with internal standard and 50% acetonitrile / water, and analyzed by LC/MS/MS.（最后）用5％氨水甲醇溶液将三聚氰胺从固相萃取小柱上洗脱下来，然后挥干溶剂，加入内标溶液和50％乙腈水溶液复溶，最后用LC/MS/MS进行分析。
2.
Applicability 应用
This method is applicable for screening of melamine in swine and poultry muscle at ≥ 50 ppb.当猪禽肌肉中三聚氰胺的浓度大于50 ppb时，可用此方法进行筛选。

G. SCREENING CRITERIA 筛选标准

1.
The retention time must match that of an external standard within 5%.
保留时间必须在外加标准品保留时间的正负5％以内。
2.
The melamine product ion abundance ratios must match that of an external standard within 20% relative.
三聚氰胺子离子的丰度比必须在（外加）标准品子离子丰度比的20％以内。

Example calculation:举例计算：
Melamine ion ratio = (area of m/z 127 to 85 peak) ÷ (area of m/z 127 to 68 peak)
三聚氰胺离子比＝（m/z 127－85这对离子的峰面积）÷（m/z 127－68这对离子的峰面积）
Note: Most mass spectrometers calculate the reciprocal of the above and state it as a percentage, which is equally valid.
注意：大多数质谱仪能够计算上面式子的倒数并且以百分比的形式表示出来，其实也是同样有意义的。
Passing ion ratio of a sample = ion ratio of a standard ± (0.2 * ion ratio of a standard)
一个样品可以通过的离子比＝标准品的离子比±（0.2 *这个标准品的离子比）

3.
The solvent blank, ACN:H2O (1:1, v/v), injected after the standard curve must be negative for melamine (no peak within the retention time window with passing ion ratio), demonstrating no carryover.
在进完标准曲线以后，要进一针空白溶剂，即乙腈/水（1:1，v/v）溶液，且在三聚氰胺出峰的保留时间位置没有出现离子比合格的峰，来证明没有残留。

4.
The positive tissue control must be positive for melamine (meeting retention time and ion ratio criteria).
阳性对照组织样品必须检测三聚氰胺呈阳性,即保留时间和离子比符合检出标准。

5.
The negative tissue control must not contain melamine at levels higher than 10% of the positive tissue control. Melamine peaks meeting the retention time and ion ratio criteria must be compared to the positive tissue control.
阴性对照组织样品含有三聚氰胺的量不能高于阳性组织样品含量的10％。即使三聚氰胺的保留时间和离子比符合检出标准也必须和阳性对照样品进行比较。

The Internal standard is used, the melamine quantification peak area (m/z 127 to 85) divided by the internal standard peak area (m/z 130 to 87) must be less than or equal to10% of that of the positive tissue control.
检测使用内标，三聚氰胺的定量峰对（m/z 127-85）的峰面积除以内标(m/z 130-87)峰面积的比值必须小于等于阳性组织样品的10％。

6. For a sample to be screen positive, it must be found to contain melamine at or above the 50ppb minimum proficiency level of this analytical method.
如果一个样品被检测呈阳性，那么它的三聚氰胺的含量必然大于或等于这种分析方法的能精确测到的最低浓度－50ppb。