1 HPLC方法的适用范围与不适合对三聚氰胺检测的原因
HPLC是高效（压）液相色谱法的英文缩写。这种仪器是在上个世纪的60年代末开始出现，它除了可用于乳与乳制品中的氨基酸、蛋白质、脂肪酸、维生素及抗生素外，还可用于核酸及生物碱等化合物以及离子型化合物的含量分析。但这种仪器用于分析（鉴别和含量测定）三聚氰胺这种非离子型的苯衍生物从原理上就不可行。
因为PPLC的工作原理已经告诉人们它适合于对沸点高、极性强、热稳定性差以及分子质量大的高分子有机物进行定量分析。而三聚氰胺的上述四点都不具备。特别是这种氮含量高的有机化合物不能溶于牛奶中，这一点无论从理论上还是本人亲自做的实验都证明了这点。根据实验发现，当三聚氰胺以粉末状形态（不超过以32ppm）加入到鲜牛奶中后，是以悬浮状态存在于牛乳中（非“溶解”）。这是因为牛乳中蛋白质具有胶体性质，而胶体是由胶体粒子组成，胶体粒子具有不透明性和高度分散性，而此时乳中的分散介质（一定量的三聚氢胺）在各个方向对不同胶粒撞击时产生的合力相等，因此像三聚氰胺这类不能被电离的有机物是能够悬浮在牛奶中的。还有就是牛乳是具有反光性质的不透明液体，因此它很容易被人误认为是“溶解”在奶中。
由于三聚氰胺不能溶解在牛奶中，因此含有三聚氰胺的牛奶样品就可能进行很好的前处理。而按国家质检总局2008年9月22日发布的在线前处理GPC-GCMS联用技术测定奶粉及奶制品中的三聚氰胺的前处理要求，样品（1~5g）用10倍量的二乙胺/水/乙腈提取溶剂(体积比10/40/50)时，三聚氰胺根本不能溶解这种混合溶剂中，也就更谈不到能提取出含有被测成分的混合液1.5mL。因为从二乙胺/水/乙腈的水合物分子式上看，这种溶剂呈碱性，而从三聚氰胺的化学结构看，这种物质是不能溶于碱性溶剂的。
而现在国家质检总局公布的22家乳品企业生产的婴儿奶粉检测出来的物质是尿素。因为尿素是典型的碱性物质，它不仅能很好溶于水和牛奶中，而且它还能溶于二乙胺/水/乙腈溶剂中，因此用此种方法检测出来的物质是尿素在理论上是成立的。
2 对HPLC方法中的“三聚氰胺”色谱图分析
从本文作者2008年9月23号在某检测单位看到的HPLC色谱图和看某检验部门在网上公布的色谱图（见图一）看，都存在着明显的不准确问题。例如：HPLC的色谱图的色谱峰在理论上乳与乳制品都是正态分布的，


但是已看到的这些图谱都不是正态分布。特别是图谱的下方发生面积重叠，由此得出样品进色谱柱与不进色谱柱回收率差别在60-110%之间变化，而且出峰时间（13.6-13.9min）也会有明显的不同。还有从国家质检总局公布的22家企业含有的三聚氰胺婴儿奶粉检测数据看也明显存在以下问题：
1、 样品抽检数量不同时，检测数据没有可比性；
2、 测量值必需是有效数字（也就是小数点保留位数一定是仪器精度的前一位）和标准差；
3 检测乳与乳制品中的三聚氰胺正确检测方法介绍
要检测乳与乳制品中的三聚氰胺最准的方法是先用红外光谱仪（振动光谱）对样品中含有的三聚氢胺的结构进行定性检测后（这种检测是非常规检测，只在极少数情况下采用），再利用普通显微镜对形态进行观察，这样就可以准确判定其是否含有三聚氰胺。显微镜法检测三聚氰胺的步骤有以下几步：第一步是从收购的牛奶底部取样；第二步是把样品用离心机离心3min；第三步是留下离心后的最后一部分（0.1ml）；第四步用吸管把收取的样品移入到载波片了；第五步是将载波片放到显微镜下用目镜16倍×物镜10倍观测，这样就可以定性检测出被检样品是否含有三聚氰胺（最小观测值0.2mg/100ml）。

正常情况，国标流动相要求ph为3左右。

酸性条件下，三聚氰胺呈弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐。在强酸和强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰胺二酰胺，三聚氰胺一酰胺和三聚氰酸。图谱上会有两个特征峰。

如果工作液和流动相不一致，很容易出现保留时间漂移

工作液和流动相不同，是说配置标准曲线的溶剂和流动相不同吗？？

我用强阳离子柱做原料奶。依照国标，用水去溶解三聚氰胺，配置标准曲线，结果用30ml乙腈处理定容的样品出峰时间和标准品就不一样，我就糊涂了，不明白了

出现两个峰是不正常的情况吗？没遇到过呢

标样中甲醇多，就出两个峰