1.前处理要做好。尤其对有机相和水相的过滤和超声，保护柱子。
2.对泵头和柱塞杆的在线清洗。防止缓冲盐对泵的磨损。

1、做完含有缓冲盐的样品后，先用10%的甲醇水（甲醇：水=9：1）冲洗管道和柱子30分钟，然后再用有机溶剂（如甲醇）冲洗管道和柱子40分钟，关机，即可。
2、做完普通样品后，用有机溶剂（如甲醇）冲洗管道和柱子40分钟，关机，即可。
3、如果仪器长时间使用，最好做完批量的样品后用甲醇冲洗30-60分钟，然后再接着做样。
4、其实对于仪器用甲醇冲洗时间长点最好。
5、冲柱子时，把灯关了，延长灯的使用寿命。
6、换柱子时要密封好。

除了关机前用流动相冲柱外，使用时每半小时用1：1的异丙醇冲泵

感觉都差不多，不过冲色谱柱时最好不要用纯水冲洗，有些柱子是不能耐纯水的。
最后就是柱和泵等保存一般采用85％或90％甲醇保存，注意柱头和泵连接头不用的时候封好。

我补充一点，手动进样器（如7725i），在使用完后应用注射器加入纯水配上专用接头打入进样器内，以清洗进样器，特别是进的样品中含盐时，更要冲洗。

我的仪器工作时间比较长，一般的仪器维护如下：
1.2~3天使用蒸馏水冲洗一下泵头和泵塞杆及密封圈；
2.3~6个月超声清洗一下流动相瓶中的过滤头；
3.严格对流动相、试样的过滤管理，严禁试样或流动相不经过滤上机；
4.趁停电或工作空闲时，打开仪器，对内部的灰尘清理一下；
5.工作空闲时，使用水、甲醇或者甲醇水混合液冲洗一下泵头、管路、检测池。有时也单独使用亚甲砜冲洗检测池的。
6.停机前，要先清洗、置换管路，盖好防尘布；开机后，要使用合适溶液过渡一下管路，一般先低流量，逐步再升到设定值。

1、    用完及时冲柱子，除了可消除色谱柱污染，也可消除检测器的污染
水系流动相先用纯水冲，再用甲醇冲，冲完甲醇保留在柱内
有机系流动相用甲醇或乙腈冲，冲干净后保留在柱内，以甲醇保留为宜
带缓冲盐的流动相应先用纯水冲，再用甲醇冲，冲完甲醇保留在柱内
2、    系统各管路连接紧密，不发生漏液，否则不但流动相损失影响测定结果和稳定性，还可能因析出固体而导致液相输液泵和宝石球单向阀发生堵塞和磨损损坏
3、    流动相的酸碱性不能太强，就我所见，流动相的pH值应该控制在3以上，9以下，个人所见，仅供参考
4、    进样前要有过滤程序，或在柱前接预处理柱，最好是接预处理柱，这样可防止固体杂质进入堵塞色谱柱
5、    样品配制最好用流动相，至少也要用与流动相性质相近的溶剂配制，以保证样品不会在进柱后与流动相发生反应而产生沉淀

我一般是设置一个自动冲洗方法，从95%水开始冲洗到90%甲醇，维持一段时间后停机。

每天做完分析之后用95％的甲醇冲洗柱子及管路，最好不用水相高的流动相长时间冲柱子（ODS柱）

1． 判断仪器脱气机是否正常：打开purge阀，流速设为2ml/min，然后提起过滤头，让体系进一些空气，再放下过滤头，看气泡是否会减少来判断脱气机是否起作用；


2． 溶剂过滤头不可超声清洗，可用35%硝酸浸泡1小时后再用溶剂清洗；


3． EDTA、乙二胺四乙酸等会对液相柱的不朽钢产生腐蚀；四氯化碳与2-异丙醇、四氢呋喃不可混合使用，但可单独使用；


4． 溶剂的使用：每两天更换或重新过滤溶剂（尤其是水，需要每天更换）；流动相过滤是为了去除微生物，一般水要放在棕色瓶中；


5． 判断purge阀的滤芯是否需更换：用水作流动相时，流速为5ml/min时，正常泵压应为0bar（若打开purge阀时，泵压超过10bar时需更换滤芯）；


6． 若用非极性溶剂作流动相，则需更换泵中起密封作用的“黑草帽”（适合反相的材料为石墨+聚四氟乙烯），而且必须一对同时更换，否则损坏更快；


7． 密封垫的冲洗：当流动相中盐的浓度>0.01M时，可减少密封垫的磨损；用1%异丙醇溶液冲洗活塞杆中析出的盐（加异丙醇是为了防止细菌生长），流速设为3-5滴/min；泵开着，洗盐装置也须开着；


8． 泵头不可用超声清洗（可用乙醇、水清洗）、宝石杆不可超声，石英窗可用超声清洗；


9． 缓冲盐的通道放在比例阀的下面，只有两相的话，只用一边（盐在下面，有机相在上面）；


10．双元泵为泵后混合方式（为高压混合方式，不易进气泡），而四元泵为低压混合方式；


11．出口球型阀（outlet ball valve）可用超声清洗；


12．双元泵有一个筛网（sieve）可控制低流速；

13．流动相使用了缓冲盐，则必为反相柱（不可长时间用水冲），一般可冲20-30min，然后加入有机相（如甲醇），浓度逐步加大，直至100%甲醇；


14．反相和正相转换时，一般要做溶剂过渡（最佳为异丙醇），因为粘度大，流速不可设太大，不要超过1ml/min（完全置换原来溶剂所需溶剂体积=体系体积（柱体积+1.5ml）×5）；


15．比例阀内漏：抬起有嫌疑的通路，看管内流动相体积是否减少（抬起时同时打开purge阀）；


16．泵压力不正常可能原因：气泡、主动阀故障、出口阀故障、密封垫或柱塞杆磨损，渗漏或堵塞、比例阀故障、传感器故障、使用比例阀混合时盐浓度太高；


17．自动进样：旁路状态、主路状态；手动进样：load状态至inject状态（最好满刻度进样，建议吸3倍以上进样体积），小体积进样则以小于1/2进样阀体积为佳；平时进样阀最好保持在inject状态（最右边状态）；


18．进样流程：插针——inject状态——load状态——进样（缓慢）——inject状态——拔出针（进样阀后有两根废液管）；


19．VWD（可变波长）检测器：检测器后out废液管不可太短，否则流通池容易进气泡，也不可太长，否则易压碎流通池；


20．DAD检测器（优势为优化条件方便）：最大波长选择——要选择溶剂没有吸收的位置（避开约20nm）；VWD检测器的灵敏度略高于DAD检测器；滤光片中钬玻璃用于校准波长；若要检测器的灵敏度提高则要开大狭缝（二极管阵列前狭缝默认为4nm）；


21．DAD检测器的氘灯可用于VWD检测器，但反之则不行；钨灯、氙灯寿命长，可随开随用，但“氘灯需要预热（10几分钟）（寿命为1000小时），1-2小时不用，不用关，还是开着更好，氘灯放时间长容易衰变”，灯可进行测试；


22．测定条件设定：reference wave（流动相中溶剂的吸收）可以不设，梯度洗脱时参考波长要设，否则会导致基线漂移，DAD可选一个样品没吸收的波长作为参考光；band width（VWD设为光谱的半谱带宽度，而DAD检测器则不用设）（此范围内作色谱图可降低噪音，信噪比更好，但信号会降低）；参考波长选择原则：样品没有吸收，但靠近样品最大吸收的位置；参考光波长带宽必须大于或等于测量光波长带宽；DAD选条件时要存所有光谱图（spectrum）；氘灯（190-800nm），但有效范围为190-600nm，钨灯（470-950nm），若用470-800nm时两灯同开则强度加大；


23．基线噪音大原因：泵压不稳、有气泡、柱污染


24．清洗在线脱气机及比例阀（尤其是长期使用水相或缓冲盐的通路）：先用水冲洗，再用甲醇冲洗，可以打开purge阀，使用5ml/min的流速，也可用IPA清洗：A、Buffer B、MeoH C、Water D、CH3CN 分析：A:B:D=20:


25．流动相pH>9.5或<2.3时，进样阀应更换tefzel转子密封，可耐受压：VWD(40bar)，MWD(120bar), FLD(20bar), RID(56bar)；RID,FLD永远是最后一个检测器。