我们公司恰好做的都是新药，结构性质什么根本没有，保密呢。所以只能自己摸索。

我说的就是的方法啊，因为我们来的化合物都是未知的.

HPLC应用范围实太是太广，从你的话中可看出你仅入门而已，还要深造，有待时日

太深奥了。

正如版主所说的步骤进行逐步筛选，对于未知的新物质（尤其是研发的新产品），更是需要耐心摸索，不断尝试。
LZ的困惑可能能理解点，摸索是蛮难的，经验多了可能就好些。初期要多查阅资料，有条件的话，最好配备点标准品。很多我们觉得的“未知物质”可能在Sigma这样的试剂公司能找的标品的。

调整HPLC分析方法开发中流动相的方法：
1、由强到弱： 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验， 这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2、三倍规则 ：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3、粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
先100%的有机溶剂，再降下来。因为有些分离96%即可分离

还有本书： 实用高效液相色谱法的建立(第2版)
很经典的，资料中心有下载的，建议LZ好好看看，找不到也可以站内短信联系我~~~

建立一个方法首先得知道你的药分析物质的理化性质，例如pKa值，极性大小，是否容易分解，溶解性，在紫外有无吸收等等。然后再研究用什么方法，正相还是反相，流动相pH，加不加离子对或者缓冲盐......啊呀，需要考虑的太多了，具体问题具体分析，给你一本书，研究去吧
实用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱法的建立[/url]
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分析的很认真啊！感谢啊！

真的非常感谢啊！非常有用！