是不是A泵和B泵放反了啊

你先确认一下，流动相A跟B没装反吧。确认无误后，单独测试A,B泵的流量，看是不是准的。这一点很重要。我觉得你这个很可能是进水的那个泵流量减少或完全堵塞了你自己没发现，倒致标准品在完全的有机系流动相状态下出的峰，才出的那么快，都跟溶剂峰重叠了。我以前出现过类似的状态，运行状态下，进水的A泵完全堵塞，但有机系的B泵正常运行，而我一直看废液出口，没发现异常啊。（因为水的比例较少）但时间就是提前了。后来找半天才发现原来是泵的问题。

谢谢大家的帮助，我们检查了下流动相，配比是没有错的，错就错在，柱子平衡后，进样太快，没有让梯度程序过柱子，所以导致我们进样的时候其实柱子里的流动相并不是我们梯度程序规定的比例，也就是说流动性不对，谢谢大家的抛砖引玉

应该是流动相的ph值有问题吧！

canis 发表:最近用HPLC做了一次C肽，用的是C18柱，A泵是0.1%三氟乙酸，B泵是70%的乙腈加0.1%三氟乙酸，发现出峰时间不对，柱子已经平衡了半个小时了已经，换了根新柱子还是这样！

是不是一时蒙了 流速没设置好？:-)