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第24楼2010/04/23
您可能把乙腈:水=10:90和乙腈:水=90:10这两种流动相看花了、搞混了呵呵。。。
用乙腈:水=10:90而不用纯水,是因为硅胶基质在纯水中的溶解度比“含有一定量有机溶剂的流动相”中大很多,其实防止缓冲盐析出只要确保体系中有足够多的水就够了,也就是说用纯水过渡或清洗也没关系,只是我们进一步的考虑了硅胶基质的溶解特性;
而在使用完后,清洗色谱柱时,后面一步用乙腈:水=90:10反向冲洗色谱柱,是为了清洗强保留化合物,它的洗脱能力没有纯乙腈强,但如果是反向冲洗的话可能这种强度就足够了。同时由于流动相中含有缓冲盐,虽然通过清洗步骤,但不管怎么样都无法完全除去,如果此时用纯乙腈(或甲醇)则会析出,而用乙腈:水=90:10则有10%可以溶解它、包容它。此外如果样品中含有强保留化合物是水溶性的,在纯乙腈(或甲醇)中不能溶解,不溶解当然很难清洗下来,而如果用水洗脱能力又太弱了,但用乙腈:水=90:10就可以兼顾洗脱能力和溶解能力。