我觉得问题出现在二氯甲烷萃取那一步，这儿有个很关键的点，就是二氯甲烷、乙腈和水的比例，一定要多加点二氯甲烷，减少水相
这样的话不难分层，而且即便直接旋干也不会太浑浊。我一般过个中性氧化铝的柱子之后就非常非常干净了！
你可以试试，等待你的效果

您好，听了你的建议后，我发现分层的清晰与否直接影响到回收率，我认为自己之前的震荡很不充分，但是有几次即使我加入了前三种药品，接着摇晃一个小时，然后再加乙腈；还有萃取时很用力的震荡，结果还是分层很模糊，有很多很多泡沫在界面上，即使静止长时间，即使水平摇晃分液漏斗，泡沫还是那么多，最后就是没有回收率。
请问，您认为决定萃取分层的关键因素在什么地方？谢谢。

谢谢，我的二氯甲烷是25ml 乙腈是50ml（25ml 两次），分液漏斗中的水是50ml，没有加上开始加入的HAH， p-TSA，和Ammonium acetate， 这三种加起来是8ml, 应该算在乙腈里，所以乙腈应该是58ml。
我觉得您说得很有道理，分层的清楚与否直接回收率，有时候同一样品，同样浓度，同时做，回收率相差很大，我一直想不明白是什么原因导致的，不知道您有没有遇到过类似的情况？
另外问您的二氯甲烷、乙腈和水的比例是什么？

具体的比例我也不是很精确，因为加二氯甲烷的时候我不是特别精确，有时候多一点有时候少一点，但保证几个样品平行加入。大概是乙腈如果是30mL的话，二氯甲烷就应该大于30ml,而水尽量控制在20ml左右。我觉得水没必要那么多，萃取的效果也能达到的。你可以大体再试试，希望这次能成功啦

真是郁闷了，我今天刚做完，但是有一个样品还是回收率很低（45%），而且我是平行三次做的。很是郁闷。这次我减少了水量，不过分层分的极不好，看这个分层我就觉得没戏了，果然是很低。但是只有这个样品这样，其他的没有问题。所以很迷惑，不知道到底问题出在哪里，因为我之前作过这个样品，还有过好的回收率，偶而的一次，我也不知道是哪里一个关键点，晃完了以后分层很快很明显，然而平行的几个就都不行。我现在很想问一下，您觉得分层主要取决于什么？

不好分层的问题可能就是出在你的水加的太多了，国标上的为10mL水和2mL二甘醇，请楼主再检查一下方法。

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我每次分层都不错啊，这样吧，要不你再试试先把鱼的蛋白去除一下，可以加一点乙酸铅，离心之后再萃取。对了，我跟你不同的是我没用二甘醇，我也没用硅藻土，难道这个也有关吗？
你试试乙腈24ml：二氯甲烷40mL:水20ml，我觉得应该比较好分层啊，虽然下层有些浑浊，但是没关系，再过个柱就可以啦，再试试吧

好的，谢谢各位了。

可以考虑用内标法做啊！

内标法吧，什么都解决了，我们这边的检验员在做一些粉样时，对于分层不好的，她们就用热吹风吹，高温有助于分层的。