薄层色谱法应用系列讲座（31）-肝郁舒颗粒质量标准的研究


摘 要

目的：建立肝郁舒颗粒的质量标准。

方法：采用TLC法鉴别方中柴胡、白芍、枸杞子、枳壳、佛手；用HPLC法测定白芍中芍药苷的含量。

结果：在TLC色谱中可检出柴胡、白芍、枸杞子、枳壳、佛手的特征斑点：芍药苷平均加样回收率为99.71％，RSD为1.6％。

结论：所建鉴别方法专属性强，定量方法简便、准确。能有效地控制制剂的质量。



本文由安徽省药品检验所的颜晓航和金斌研究人员摸索了多种薄层色谱条件和HPLC分析条件的优化，值得参考。

摘自《药物分析杂志》的论文，联系第一作者yxh 2843925@ 126, com



前 言

肝郁舒颗粒为新研制的中药三类复方制剂，由白芍、柴胡、北沙参、香附、郁金、枸杞子、酸枣仁、龙骨、牡蛎、枳壳、佛手、木香12味中药组成，具有舒肝解郁、理气和中之功效，主治妇女经前期紧张综合症。为了有效地控制该制剂的质量，采用TLC法对柴胡、白芍、枸杞子、枳壳、佛手进行了鉴别，用HPLC法测定了白芍中芍药苷的含量，为肝郁舒颗粒的质量标准制订了简便可行、准确可靠的定性定量检测方法。



实 验

1 仪器与试药

LC－10AT泵、SPD－10A紫外检测器、C－R7 A数据处理仪、UV－260紫外可见分光光度计（日本Shimadzu公司）；CQ250超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）；硅胶G薄层板（烟台市化学工业研究所）；AG285电子天平（瑞士Mettler公司）；柴胡、枸杞子、枳壳、佛手对照药材及芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，对照品为供含量测定用）：肝郁舒颗粒及阴性对照样品（合肥经方医药科技开发有限公司）；乙腈为色谱纯；重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

2 鉴别

2．1 柴胡

取本品5g，加水30 ml搅拌使溶解，离心（3000 r·min -1）l0 min，取上清液，置分液漏斗中，用乙醚30mL振摇提取，弃去乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，加人等体积的正丁醇饱和的氨试液，摇匀，放置使分层，分取上层液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺柴胡的阴性样品同法制成阴性对照溶液。再取柴胡对照药材1 g，加水30 mL，加热回流I h，滤过，滤液照供试品溶液制备方法，自“用乙醚30 mL振摇提取”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述3种溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水（13:7:2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点或黄色荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1。




2．2 白芍

取本品4 g，加水20mL，搅拌使溶解，离心（3000 r·min-1）l0min，取上清液，置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯1 ml，使溶解，作为供试品溶液。另取缺白芍的阴性样品同法制成阴性对照溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：l0：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛的硫酸乙醇溶液（1→l0），加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，见图2。


2．3 枸杞子

取“2．2”白芍项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取缺枸杞子的阴性样品同法制成阴性对照溶液。再取枸杞子对照药材1 g，加水20mL，加热回流I h，滤过，滤液照供试品溶液制备方法，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一乙酸乙酯一甲酸（9：1：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图3。

薄层色谱法应用系列讲座（31）（下）-肝郁舒颗粒质量标准的研究

2．4 枳壳

取“2．2”白芍项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取缺枳壳的阴性样品同法制成阴性对照溶液。取枳壳对照药材1 g，加水20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液照供试品溶液制备方法，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起，同法制成对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯一甲酸一水（10：2：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图4。


2．5 佛手

取本品10 g，研细，加无水乙醇50 mL，超声提取20min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇1 ml，使溶解，作为供试品溶液。另取缺佛手的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。再取佛手对照药材0.5g ，加无水乙醇10 mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图5。


3 含量测定

3．1 检测波长的选择

参考文献［1］，并对芍药苷对照品溶液于200～350 nm波长范围内进行扫描，其在230．6 nm波长处有最大吸收且灵敏度最高，故选定检测波长为230 nm。

3．2 色谱条件

色谱柱：Shim-Pack VP－ODS（4.6mm×I50 mm，5 μm）；流动相：乙腈一水（13：87）；流速：1 mL·min-1；检测波长：230 nm；柱温：室温；进样量：20μL；理论板数以芍药苷峰计算为7410。

3．3 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品，加流动相制成每1 mL含0.0548 mg的溶液，作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液3 mL，置l0mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

3．4 供试品溶液的制备

取本品适量，混匀，研细，取约0.5g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，离心（15000 r·min-1）l0min，取上清液作为供试品溶液。

3．5 线性关系的考察

精密吸取上述对照品储备液1，2，3，4和5 mL，分别置10 ml、量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，以芍药苷进样量（μg）为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：

A＝1479384.1 C － 3000.9 r＝0.9999

结果表明，芍药苷进样量在0.11～0.55 μg范围内线性关系良好。

3．6 空白试验

取不含白芍的阴性样品，按供试品溶液制备方法提取，并按上述色谱条件进行检测。结果在芍药苷对照品相同保留时间处无干扰峰出现（见图6），表明处方中其它药味对芍药苷的测定无干扰。



3．7 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定芍药苷峰面积，结果RSD为0.25％。

3．8 稳定性试验

取供试品溶液，分别于配制后的0，l，2，3，4，5，6，8，12，24 h进样测定，其峰面积RSD为1.3％，表明供试品溶液在24 h内稳定。

3．9 重复性试验

取同一批号（020308）的样品6份，按供试品溶液制备方法制得，并按上述色谱条件测定，测得芍药苷平均含量为3.11 mg·g-1

黑色圆珠笔油墨种类的薄层色谱法鉴别

摘　要: 以甲醇为提取剂, V (乙酸乙酯) ∶V (无水乙醇) ∶V (水) ∶V (冰乙酸) = 12∶9∶4∶0. 3 做展开剂, 利用薄层色谱法展开圆珠笔油墨后的斑点个数、颜色和比移值, 将国内外不同厂商生产的32 支黑色圆珠笔分为12 类, 实验结果表明:该法对鉴别黑色圆珠笔准确度高, 具有一定的可靠性和稳定性。

作者介绍

本文由首都师范大学化学系的许荣富, 王志勇, 邹　洪等研究人员共同完成的北京市教委基金(KM200510028006)资助项目。因各国的圆珠笔油墨种类繁多但主要成分又十分相近，给鉴别的可靠性带来大难度。本文做了一些条件筛选和比对但缺乏标样点板的展开图谱。

摘自第26 卷增刊　《分析试验室》

前 言

在刑事技术物证分析领域, 分析圆珠笔油墨的方法有薄层色谱法[1 ] 、气相色谱法[2 ] 、高效液相色谱法[3 ] 、毛细管电泳法[4 ] 、质谱法[5 ] 和光谱法[6 ]等, 其中薄层色谱法(TLC) 是鉴定圆珠笔油墨的化学方法中, 应用比较早也比较广泛的方法。它主要是通过流动相和固定相将油墨中混合染料进行分离, 然后根据斑点的个数以及各斑点的颜色、比移值进行分类鉴别。该方法快速、可靠且灵敏度较高。本文利用TLC 法对市场上常见的32 种黑色圆珠笔油墨进行了分类。利用这一结果可以对司法案件中的可疑文件进行分析鉴别, 同时为进一步研究黑色圆珠笔油墨的色痕形成时间和高效液相色谱法的分析打下基础。

1 　实验部分

1. 1 　仪器

CAMAG Reprostar3 薄层色谱软件, winCATS 数码相机系统, Merck 高效薄层板GF254 (200 mm ×100 mm) 、薄层色谱展开缸(上海信宜仪器厂制造) 、玻璃点样毛细管(内径0. 5 mm , 华西医科大学仪器厂生产) , 定量毛细管(美国Drummond 厂) ,紫外灯(254 nm , 365 nm) 。

1. 2 　试剂与样品

碱性品蓝、甲基紫、结晶紫、罗丹明B、甲醇、乙酸乙酯、无水乙醇、冰乙酸、N，N二甲基甲酰胺(DMF) 、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、二甲基亚砜(以上试剂均为分析纯) , 二次重蒸水, 复印纸(百旺牌A4 打印纸) 。市售的33 种国内外不同厂商的黑色圆珠笔。

1. 3 　实验方法

1. 3. 1 　标准样品的制备　

分别取甲基紫、结晶紫、碱性品蓝、罗丹明B 等标准品, 用甲醇溶解,配成0. 01 g/mL 的标准溶液。

1. 3. 2 　圆珠笔字迹提取液的制备　

将各支黑色圆珠笔在复印纸上划线, 用洁净的手术刀片截取2cm 长, 剪碎放入0. 5 mL 锥形小试管中, 分别加入20μL 甲醇在室温下提取10 min。

1. 3. 3 　点样　

在硅胶板(使用前需在100 ℃活化30 min) 上用毛细管点样, 点样体积约为5μL 。对所有标准品和样品都进行上述的重复性操作。

1. 3. 4 　展开　

将硅胶板置于盛有V (乙酸乙酯) ∶V (无水乙醇) ∶V (水) ∶V (冰乙酸) = 12∶9∶4∶0. 3 展开剂(实验前需室温下饱和2 h) 的薄层色谱展开缸中。展开后, 将展板取出, 阴干。

1. 3. 5 　记录　

分别在可见光以及紫外灯照射下进行观察并拍照, 记录各圆珠笔油墨展开后的斑点个数、斑点颜色以及各斑点的比移值。

2 　结果与讨论

2. 1 　实验分类结果

标准样品的斑点比移值、颜色和32 支黑色圆珠笔的分类情况见表1 和表2。


从分类结果可看出甲基紫、结晶紫、碱性品蓝是黑色圆珠笔中的主要组分, 少数笔还含有罗丹明B , 但是不少笔中还含有未知斑点, 需要进一步进行分析。

2. 2 　提取剂的选择

取部分黑色圆珠笔样品在复印纸上划线, 用洁净的手术刀片截取2 cm 长, 剪碎放入0. 5 mL 锥形小试管中分别加入甲醇、乙酸乙酯、无水乙醇、冰乙酸、DMF、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、二甲基亚砜各20μL 在室温下进行提取10 min , 对提取后纸张上的残留情况进行比较, 结果发现, 甲醇、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺对于黑色圆珠笔字迹的提取比较完全, 甲醇和DMF 提取后的纸张上几乎不存在残留物, 但是由于DMF 的沸点较高,因此不作为提取剂的首选, 同时, 甲醇与乙腈相比, 甲醇的沸点更低, 因此圆珠笔的提取选用甲醇做提取剂。

2. 3 　展开剂的选择

通过对一些油墨或常见染料分离时所使用的常见的展开体系[7～13 ] 进行实验, 结果发现V (乙酸乙酯) ∶V (无水乙醇) ∶V (水) = 70∶35∶30 的展开体系更有利于本实验中的黑色圆珠笔的分析, 可以使更多的组分分离, 得到的斑点个数最多。但是这种展开体系也存在缺陷: 如斑点之间比移值非常接近甚至有的是两种颜色斑点的重叠, 而且黑色圆珠笔中部分笔的结晶紫和甲基紫斑点略有拖尾现象。因此, 对这种展开体系进行优化。通过实验发现V (乙酸乙酯) ∶V (无水乙醇) ∶V (水) = 12∶98∶4 的展开体系使一些比移值相近甚至两种颜色重叠的斑点得到了进一步分离, 但是结晶紫和甲基紫斑点仍略有拖尾, 因此, 向该展开体系中分别加入少量冰乙酸(0. 1、0. 2、0. 3 mL) , 对上述选择的黑色圆珠笔进行实验, 结果表明, 当加入0. 3mL 的冰乙酸可以很好的

抑制拖尾现象且不影响分离效果。因此, 本实验选择V (乙酸乙酯) ∶V (无水乙醇) ∶V (水) ∶V (冰乙酸) = 12∶9∶4∶0. 3 的展开体系。

2. 4 　影响展开结果的各种因素

2. 4. 1 　硅胶板的活化　

因为硅胶的活性、粒度和孔径会影响分离效果, 在进行该实验的过程中将硅胶板在110 ℃保持1 h 对其进行活化以提高分离效果。

2. 4. 2 　展开剂的饱和时间

　 在该实验过程中遇到一些问题, 对饱和时间20 min , 1、2、3、4、5、6 h进行了考察, 发现饱和时间不能太短, 否则出现略微的拖尾现象以及同一条件下同一物质展开斑点的比移值不同, 分离效果不好等。结果发现饱和时间达到2 h 展开效果较好。

2. 5 　纸张的影响

为了排除所出现的斑点可能是纸张上的提取物, 本实验选取了10 种不同的纸张, 分别用甲醇提取, 然后分别在本实验条件下测定, 结果表明:无论在白光还是紫外光照射下, 硅胶板上未出现任何斑点, 故可认为纸张对染料的分析没有影响。

2. 6 　重现性考察

在控制好硅胶板的干燥程度、层析板的薄层厚度、实验室的湿度和温度、点样等因素的条件下, 随机选择5 支黑色圆珠笔相隔数天分别进行了3 次展开实验并进行测定, 结果表明各圆珠笔斑点的个数重现性良好, 各斑点的比移值误差在Rf ±0. 02 之间, 可认为不影响分类的结果。



结束语：应用薄层色谱方法的用户相对少，该方法的应用范围也窄点，但不能忽视它的重要性，特别是薄层扫描仪的迅速发展后，不仅用量少有时可以做到不破坏样品成分能让你完成定性定量分析，也可以在薄层原位上进行化学反应，以提高检测灵敏度，因而吸引不少人的使用。又因高压薄层的引进，大大缩短了分析时间、提高了分析的精密度及制备色谱的应用范围。

这么好的帖子，怎么没人评价啊

是不错，不注册看不来啊

哈哈哈 这个东西现在还在使用？