yhl-87_
第61楼2009/11/10
yhl-87_
第62楼2009/11/10
yhl-87_
第63楼2009/11/10
yhl-87_
第64楼2009/11/10
yhl-87_
第65楼2009/11/10
yhl-87_
第66楼2009/11/10
yhl-87_
第67楼2009/11/10
w200761140
第70楼2011/07/20
(41讲)
唾液中滥用药物分析及其与血液中药物浓度的相关性
摘 要
唾液是一种成分简单、易于采集的体液,某些药物在唾液中的浓度可以反映其血药浓度。本文分析了滥用药物进入唾液的机制和影响因素,综述了唾液中滥用药物分析时样品的采集、前处理和检测方法以及唾液与血液中药物浓度的相关性。 认为唾液是临床和法医学方面很有价值的分析样品,用唾液中滥用药物浓度来推测血药浓度具有一定的法医学意义。
本文由山西医科大学法医学院的李鹏旺、王玉瑾、刘俊芳共同完成的山西高校科技研究开发项目和自然科学基金资助项目的部分内容,现全文介绍如下。第一作者的联系方法:0351-4135142 lpw991005@yahoo.com.cn
前 言
常规体内滥用药物的检测主要是选用尿液、血液或器官作为检验材料,但在现场检测滥用药物时,唾液较血液易于采集,可避免因抽血带来的身体不适、晕血及感染等,且具有不侵害他人隐私、不受时间!地点的限制、无须对收集人员进行专门训练、可防止掺假替换等优点,是滥用药物现场检测较好的生物检材[1~3]。近年来对于唾液与其他体液中药物含量相关性的报道较多[2~8],用唾液代替血液在临床研究、治疗药物监测以及吸毒者滥用药物的分析等方面均有重要意义。
实 验
1 滥用药物进入唾液的机制及影响因素
唾液是一种由腺体分泌的蛋白含量很低的液体$ 唾液与血浆药物浓度比(saliva/plasma,S/P)主要由药物经血液进入唾液的转移机制所决定.。对滥用药物而言,可能的路径主要为被动扩散、主动转运和超滤作用[9~11]。 唾液中药物浓度的影响因素包括药物的分子量、脂溶性、药物特性、分子空间结构、电离度(pKa)、游离态药物水平、血液和唾液中的药物血浆蛋白结合率及唾液pH值和流速等[9,12]. 一般来说,药物分子量越小,脂溶性越高,药物跨膜转运的透过率越高,但目前认为分子量和脂溶性是次要影响因素,药物的pKa 和蛋白结合率及唾液的流速、pH 值是S/P 的重要影响因素[12]。 高蛋白结合分子不可能进入唾液[11],因而药物蛋白结合率对唾液药物水平有显著影响[13]。此外,唾液pH值!唾液流量对唾液中药物浓度也有一定影响[9]。影响S/P 的另一因素是动静脉循环[3]。和药物在口腔前庭的吸收。 例如"四氢大麻酚(THC)以被动扩散方式进入血液,大部分在血中与蛋白质相结合,所以唾液中的浓度非常低。若检出唾液中THC浓度很高,则意味着此为吸食大麻烟时口腔粘膜的药物分子残留所致[14]
2 唾液中药物的分析研究
2.1 唾液的采集
唾液的采集方法多种多样[12]根据是否受到刺激分为非刺激法(自然取样法)和刺激法。非刺激法条件下唾液直接流入容器内,流速慢,仅约0.05mL/min。刺激法分为物理刺激法和化学刺激法:物理刺激法即放置固体石蜡,橡皮条或棉球等物质于口腔中,刺激唾液分泌,流速为1~3mL/min;化学刺激法是用酸刺激味觉或者毛果芸香碱刺激唾液分泌, 流速可达5~10ml/min。 目前商品化的唾液采集装置相继出现,如棉花卷[10]、专用的唾液收集管[2]、以及口腔标本采集装置等[15]。Crouch[16]研究发现,采集方法对唾液中药物浓度有显著影响$,实验证明唾液中可待因的平均浓度在非刺激条件下比酸刺激条件下高3.6倍,比机械性刺激低50%,是商品化采集装置的77%。Shellee[2]的实验证明,酸刺激组和非刺激组相比,非刺激组唾液与血液药物浓度相关度(0.901) 明显高于酸刺激组(0.872) 说明酸刺激采集对唾液与血液药物浓度相关性有不利影响.
2.2 唾液的前处理
为提高唾液中药物检测的准确度和灵敏度,在仪器分析前必须对唾液进行必要的前处理。常用的前处理方法主要有液-液萃取和固相萃取。 液-液萃取技术利用样品中不同组分分配在两种不相混溶的溶剂中,以溶解度或分配比的不同来达到分离、提取或纯化的目的,所用设备简单,操作容易,被广泛应用于滥用药物的分析[1,17,18]。液-液萃取法的缺点是需要消耗大量有毒有害的有机溶剂、繁琐费、萃取过程中易发生乳化现象而影响萃取率、难以实现自动化等。 固相萃取克服了以上缺点, 唾液中药物固相萃取处理时,洗脱溶剂多为以水为主的溶剂系统,毒性小,无乳化现象,不易引入杂质[3]。Navarro等[3]建立了固相萃取提取唾液中的亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)和亚甲基二氧基苯丙胺(MDMA)的方法,回收率分别为90%和92%。自动固相萃取装置可一次性连续萃取100多个唾液样品,增加了样品的处理量,减少了溶剂的使用,重现性更好。
2.3 唾液的检测方法
目前唾液中滥用药物及其代谢物常用的分析方法包括酶免疫测定法(EIA)放射免疫测定法(RIA)气相色谱法(GC)、气相色谱F质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等。
免疫测定法(IA)是利用抗原抗体免疫反应原理来检测滥用药物,包括EIA、 RIA 等多种方法。EIA 和RIA法常用作筛选,还需GC-MS 或LC-MS来确证。用免疫试剂条现场检测滥用药物的报道很多,该法简便快速,但易出现假阴性,只能用作初筛[19,20]。
Niedbala等[15,21]建立了唾液样品中阿片和大麻的EIA 筛选法,用GC-MS/MS法定量,检材量可低至2.5×10-10L具有很高的灵敏度。Huestis等[6]则用RIA法测定受试者唾液中THC,结果与GC-MS分析结果一致。Kintz等[19]报道用免疫试剂盒检测唾液中可待因, 检测限为100ng/mL。如果药物浓度太低、唾液中存在干扰物或者操作失误等,都有可能导致假阴性的出现, 近年来对于唾液中乙醇试剂盒的研究也很多,曾立波等[20]利用酶学原理, 对唾液中乙醇含量进行半定量, 与GC-MS法定量结果基本一致,检测过程仅需2min 灵敏度高,特异性好,适合现场使用。
GC法已广泛应用于滥用药物的唾液分析。Gubala{7}用GC-FID 法检测唾液中乙醇浓度, 日间精密度(RSD)为3.6% 但GC 法对于挥发性较差的目标物,需采用制备衍生物或裂解等方法以增加其挥发性。
GC-MS法可以得到被测物的分子结构信息$特别适合于未知滥用药物的分析。Campora 等[18]建立了GC-PCI-MS 检测唾液中可卡因及其代谢物的方法$检测线性范围25~1000ng/mL重现性好,回收率接近100%。爱康宁甲酯(EME)的检出限LOD为0.9ng/mL,可卡因为2.2ng/mL,苯甲酰爱康宁(BEG)为0.2ng/mL。质谱检测器在使用全扫描时,对较低浓度的样品要求预富集,选择离子监测(SIM)可以使灵敏度大幅度提高, 但降低被测物的定性信息,Cognard 等[22]用GC-MS-MS定量分析唾液样品中可卡因及其代谢物,在不降低定性信息的前提下使得选择性和灵敏度都有很大的提高,
与GC 法相比,HPLC适用范围更广, 李俊杰[4]用HPLC荧光法检测唾液中的乙醇含量, 流动相为0.1mol/L醋酸胺溶液和63%乙腈,方法回收率达95%。以上,日内和日间RSD 均小于5%,重现性较好,唐哲等[23]建立了HPLC 检测唾液中的卡马西平的方法,方法平均回收率可达99%以上, 日内和日间RSD 分别为2.6%~4.9%和3.0%~8.6%
LC-MS或LC-MS/MS具有液相色谱的高效在线分离能力和质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力,越来越多地用于唾液中的滥用药物分析。Mortier等[24]建立LC-MS法同时检测唾液中可待因、吗啡、苯丙胺、可卡因及其代谢物BEG 等,样品经固相微萃取处理后进行LC-MS分析,回收率达90%以上。Wood等[25]建立了唾液和血液中苯丙胺的LC-MS/MS 定量分析方法,操作简便且样品用量少。
3 唾液与血液中药物浓度相关性的研究
血药浓度在临床药物监测和法医学鉴定中是一个重要的参数,可为中毒判断提供直接依据, 但血液的采集和样品前处理比较麻烦, 而唾液样品较易采集,样品成分简单,前处理方便,鉴于许多药物在血液与唾液中的浓度密切相关,可以考虑用唾液代替血液作为药物监测的样本,唾液与血液中药物含量的相关性研究,可以为滥用药物的现场检测和法医学鉴定提供理论基础
关于唾液和血液中滥用药物尤其是精神药品相关性的研究已相当广泛,大多数精神药品血药浓度和唾液药物浓度具有很好的相关性。Shellee等[2]对左乙拉西坦(LEV)进行了研究,血液和唾液样品在两个不同的实验室进行测定,线性回归评价其相关性,唾液与血液左乙拉西坦平均浓度比在两实验室的测定结果分别是(41.0±0.15)和(.36.0±0.15)两实验室的相关系数(r)无显著性差异,分别为0.87和0.86(P <0.0001)认为唾液和血液LEV浓度呈显著关。 林中等[8]对四种抗癫痫药物在唾液与血清中浓度的相关性进行了研究,结果显示,四种药物在唾液与血清中的浓度之间有较好的线性关系,其r 分别为:卡马西平0.9760;苯妥英钠0.9556;苯巴比妥0.9620;丙戊酸钠0.9286,可根据唾液药物浓度来计算相应的血药浓度值。研究证明,多种毒品血药浓度和唾液药物浓度也具有良好的相关性。O’Neal等[5]对口服可待因后血液和唾液中可待因含量进行分析,结果显示,用药后2h可待因S/P基本保持稳定(S/P = 3~4)。在吸收相、唾液与血液相关性强(r = 0.809, P <0.05)平均S/P保持常量(M = 3.7)。因此推论,可以用唾液中可待因来估计血液的可待因浓度。 Huestis 等[6]同时采集吸食大麻后唾液和血液样本GC-MS法分析其中THC 吸食后0.3~4.0h,THC平均S/P为1.18两者具有相关性。Navaeeo等[3]对唾液和血液中甲基苯丙胺浓度相关性进行了研究,发现甲基苯丙胺的S/P为32.3~1.2,1.5h达到峰值, 其比值为.18.1且S/P 受唾液pH值的影响。Gubala等[7]检测了唾液和血液中酒精浓度,结果显示唾液和血液酒精浓度也存在高度的相关性。
4 展望
生物样品中滥用药物的检测受到越来越多毒物分析工作者的重视,而寻求一种快捷、简便、灵敏、准确的分析方法和简便的样品采集装置尤为重要。唾液检测具备采样方便、操作简单等特点,可以用于现场快速检测,其检测方法也逐步走向自动化、快速化,已成为滥用药物的法医学检验鉴定的一个重要方法。但唾液中药物检测受到采集技术与方法、 药物特性、给药途径、个体差异、年龄、机体生理疾病及情绪状态等因素的影响较大,因此应逐步建立唾液采集标准方法和检测标准。唾液中滥用药物的检测技术在今后会趋于成熟,并有重要的应用价值。