tc397yu(tc397yu) 发表:缓冲液的配置(最佳方法)
1.将缓冲液药品溶解在水中制成缓冲液(溶液A)
2. 用pH计确定或调节溶液A的pH。
3.将一定体积(如200mL)的有机溶剂B与由步骤2配制的溶液A(如800mL)混合,制成最终流动相(此处的有机相为20%)
4.检查最终流动相的pH(此步骤为选项) 由于测定含有有机调解剂的流动相pH计发生飘移,使其测定pH不很可靠.所以上面的步骤4一般只有在考察误差的主要来源时采用,大多数实验室皆略去此步骤。
另外要注意上表中调节剂的浓度,不适当的浓度和波长选择,会造成基线本底吸收太高,基线不稳,影响分析。要注意溶剂的互溶性,不相混溶的溶剂不能用作洗脱的流动相。有些溶剂在一定的比例内互溶,超出一定的范围后就不会互溶。例如:乙腈和1mol/L的醋酸铵(pH5.16)做梯度洗脱,乙腈含量超过70%时就会出现不溶,甲醇和已烷混合,甲醇含量高于30%时就会分层等。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体,尤其使用磷酸盐时需特别小心。