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garnettliang
第27楼2010/03/03
plexu(plexu) 发表:正相HPLC色谱柱的清洗、再生和维护方法
正相柱一般包括硅胶、CN基、Diol和氨基柱。最好是事先采用预防性的措施，如样品过滤、用预柱和保护柱的方法，以尽可能的减少色谱柱的污染。下面的方法有助于延长正相色谱柱的使用寿命，运用方法中的理念，也可以用来诊断解决色谱柱使用中的疑难问题。
清洗步骤
1. 每次清洗都用低流速起步，当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速。
2. 先用10柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂，如正己烷、氯仿等反冲色谱柱。
3. 再用20柱体积的诸如二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂反冲色谱柱。
4. 100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉。如果异丙醇的清洗还不足以恢复色谱性能，则说明色谱柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法无法解决这个问题。色谱症状和清洗再生过后的色谱性能恢复情况往往能提供色谱柱真正存在问题的线索。
正相柱除水分
诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归因于固定相的变化，而填料可能还是完好的。在正相色谱中，固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键参数。大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分（正己烷20摄氏度下水分含量是0.0111% w/w ), 正相色谱柱中水分含量随时间的不同是导致选择性变化的最普通的一个因素。
用含2.5 % 二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5 % 冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱30个柱体积，可以去除色谱柱中水分并恢复色谱柱原来或所需要的选择性。
考虑到从流动相和色谱柱中完全去除水分非常困难，还有个尚有争议的简单方法可以采用。使用水分含量可控的流动相（譬如和水半饱和）以一直保持最初的方法选择性，而不需要每次进行冗长的除水分步骤。不管何种情况，最重要的都是保持水分条件的一致性。
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plexu
第29楼2010/03/20
正相色谱中“半饱和”流动相的使用和配置方法：
在正相色谱分离模式中，水是一种溶剂强度非常高的溶剂，即便流动相中有少量的存在就能对保留时间产生强烈的影响，特别是在硅胶或氧化铝为固定相而使用的流动相非极性或疏水性很强的情况下尤其是这样。因为烷烃类溶剂天然含水量极低，基于无水烷烃的流动相，需要很长时间才能和环境中水分达成平衡。所以，正相色谱中几天的时间观察到保留时间的漂移是司空见惯的。可能正是存在这个令人头疼的问题，成为了当今正相色谱没有反相色谱那么普及常用的主要原因。
使用溶剂强度ε0大于0.35的流动相，保留时间漂移的问题不大，用极性基团键合的正相固定相时，ε0值还可以更小些。此外，还有一个非常有效的改善正相色谱保留时间重现性的方法：使用和水“半饱和”的正相流动相。
半饱和流动相配置方法：将无水德非极性流动相分成两半；其中一半中加入一定量水，并混匀搅拌约一小时，静止分层后，将多余的水相全部除去；将两部分重新混合在一起就配成了“半饱和”流动相。
使用“半饱和”流动相，使色谱柱平衡时间大大加快，极大改善了保留时间的重现性；另外流动相中的一定量水分，首先和固定相表面的活性最大位点作用，结果使表面不均一性减少，非特异性吸附影响减弱，可获得更对称的峰形。