东风恶
第11楼2010/03/08
结果与分析:
1.线性关系与最低检测限:
分别取16种氨基酸质量浓度均为55.6mg/L、27.8mg/L、13.9mg/L、7.0mg/L和3.5mg/L的对照混合溶液,按照上述方法进行衍生,加入0.5g/L正亮氨酸内标溶液10微升,以各种氨基酸面积与正亮氨酸面积之比Y为纵坐标,氨基酸实际质量浓度X(mg/L)为横坐标,进行线性回归,得到的线性回归方程,r均大于0.99。当信噪比为2时,亮氨酸的最低检测限为0.56mg/L。
2.回收率:
取样品,加入一定量的游离氨基酸标准品后,照前述方法进行衍生后进行测定,回收率均大于0.95.
3.衍生物存放条件:
把标准品衍生后放置1、3、5、7、10天,进行峰面积对比。RSD小于2.0%。
4.以前3批样品结果对比:
3批样品结果无差异。个别氨基酸(门冬氨酸、赖氨酸)差异较大。
5.色谱条件通用性比较。
UltimateTM (XB-C18, 5um, 4.6×200mm);waters氨基酸分析柱。结果对比发现分离度均大于1.0,月旭色谱柱在分离度上优于原waters氨基酸分析柱,分析认为月旭色谱柱长于waters氨基酸分析柱。
理论塔板数均大于3000,而月旭色谱柱均大于5000。分析认为waters氨基酸分析柱为专用氨基酸分析色谱柱,可能更适合其专有的色谱条件。
东风恶
第13楼2010/03/08
附:1-异氰酸萘酯衍生法测定24种氨基酸
一. 色谱条件:
1. 色谱柱:C18 (250MM*4.6MM)
2. 流动相组成:
A. 乙腈11ML+0.1MOL/L磷酸二氢钠2.5ML混合,用氢氧化钠液调至PH值为5.75,加水到100ML;
B. 乙腈60ML+0.1MOL/L磷酸二氢钠5.0ML,加水到100ML;
C. 甲醇12.5ML、乙腈2.5ML、磷酸盐缓冲液(0.1MOL/L磷酸二氢钠、0.1MOL/L醋酸钠液用磷酸调至PH值为5.4)4.5ML混合,加水至100ML;
D. 乙腈45ML、酸盐缓冲液(0.1MOL/L磷酸二氢钠、0.1MOL/L醋酸钠液用磷酸调至PH值为5.4)4.0ML混合加水至100ML
3. 梯度洗脱表
时间(MIN.) A B C D 其他
0~10 70%乙腈
10~40 100%
40~85 100%
85~160 100%
4. 流速:1.5ML/MIN;检测波长:222NM;进样量:2μl。
二.样品测定
1.一般用3.0%的高氯酸提取(氨基酸含量在2μmol,0.1ml),,内标物为正亮氨酸,用氢氧化钠中和并加入25μl硼酸缓冲液(0.1MOL/L硼酸用氢氧化钠调PH为6.25),再加入1-异氰酸萘酯125μl(2.5μl/ml丙酮液),45S后加环己烷1~2ML,漩涡混合10分钟,0.45μm膜过滤静置15分钟,取水层进样。
2.保留时间:20~150分钟内出峰顺序:
天门冬氨酸、谷氨酸、天门冬酰胺、丝氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、牛磺酸、组氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、内标物、苯丙氨酸、色氨酸、 胱氨酸、 半胱氨酸、 鸟氨酸、 赖氨酸
三.试剂与耗材
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以上24种氨基酸分析的方法,我推荐给我一个同学在使用,主要做保健食品氨基酸测定。