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  • tigertooth

    第21楼2010/04/14

    多糖紫外一般没吸收，不过加一个紫外倒是一个好主意，因为蛋白肯定有吸收。
    你用的TSK柱适合多糖和水溶性高分子，蛋白有可能会有吸附，至少我用这款柱子做BSA时，用Ph6.8的PBS，蛋白质单体和多聚无法分开，而且拖尾严重。所以我推测，你离子交换柱分出的3个峰，也许有一个是蛋白质的，但它上TSK柱就被柱吸附了，别忘了你是用纯水做流动相，洗脱能力可定不够。
    我建议你用紫外加示差试试。

    xinxueqian(xinxueqian) 发表:用蒸发光散射检测器不能说明你的样品纯度，应该用紫外

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  • hnkjzyj

    第22楼2010/04/15

    谢谢斑竹....
    首先，实验室有PDA、ELSD，没有示差...所以，洗脱条件这一块一直没有好的办法，不能用缓冲液洗脱，限于自身条件.....
    其次，我用离子交换柱分出的3个峰，蛋白含量都没超过10%，应该都属于多糖...

    tigertooth(tigertooth) 发表:多糖紫外一般没吸收，不过加一个紫外倒是一个好主意，因为蛋白肯定有吸收。
    你用的TSK柱适合多糖和水溶性高分子，蛋白有可能会有吸附，至少我用这款柱子做BSA时，用Ph6.8的PBS，蛋白质单体和多聚无法分开，而且拖尾严重。所以我推测，你离子交换柱分出的3个峰，也许有一个是蛋白质的，但它上TSK柱就被柱吸附了，别忘了你是用纯水做流动相，洗脱能力可定不够。
    我建议你用紫外加示差试试。

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  • tony-pku

    第23楼2010/04/16

    你这个现象确实奇怪！不过根据我的判断有可能是柱子问题柱效不够高，还有DEAE和柱子是基于不同的原理，所以就此得出不同结果也就不足为怪了！同时由于你这个多糖不可能就是单一组分，所以要想得到多组峰，还是要考虑柱子问题，看看其他柱子有没可能分开， 等你有了结果也来汇报汇报。

    hnkjzyj(hnkjzyj) 发表:谢谢斑竹....
    首先，实验室有PDA、ELSD，没有示差...所以，洗脱条件这一块一直没有好的办法，不能用缓冲液洗脱，限于自身条件.....
    其次，我用离子交换柱分出的3个峰，蛋白含量都没超过10%，应该都属于多糖...

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  • ytboy652

    第24楼2010/04/16

    应该是用GPC更好一些吧

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