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  • 第12楼2005/10/24

    可这是同一个样品偶尔的情况！（且偶然的重复较好）
    而且即使让流程走完，后面也没有什么吸收峰了！

    我的溶剂是水！

    zhaoguobin 发表:一个流程没有走完,第二针给赶出来了!

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  • 第13楼2005/10/24

    感谢精彩的解释！我也很担心仪器问题！我是个初识仪器者，请给我一个好的检查过程好吗？
    例如如何判断是否平衡好柱子，检测池中有污染，还有自动进样器中的垫片老化松驰，及污染。
    再次表示感谢

    linlicheng 发表:问题好象很多哦！
    首先你的梯度洗脱在起始和结束都未给足平衡时间。即在同一个浓度水平上应该让它走3分钟以上。如果其它条件全都排除了则可能是此问题，也就是两个进样之间未平衡好柱子。你可以用标准品确定目标物峰是哪个RT，看它是否飘移。
    此外，检测池中有污染，或者自动进样器的洗针液不对，或者自动进样品中的垫片已老化松驰，有污染，或者柱子使用前一直含一些盐的颗粒未洗干净须好好冲洗并平衡好再使用，或者你配的流动相水质或有机溶剂中杂质干扰等等都有可能。
    也许还有其它原因。
    好好检查一下就会好的。

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  • 第14楼2005/10/24

    在赶气泡过程中，当赶A泵气泡时，流速为100ml/m，A泵泵压为180psi, B泵为90psi， 而赶B泵气泡时，流速为100ml/m，A泵泵压为0psi,B泵为80psi。但在洗脱过程中，AB泵的泵压均保持一致！
    这应该是不正常吧 ！问题在哪里？

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  • 第15楼2005/10/24

    是不是条件不能保证恒定呢？可能和溶剂有关，走一针溶剂看看应该

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  • 第16楼2005/10/25

    应该是柱子没有平衡好 ,

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  • 第17楼2005/10/26

    可能梯度混合过程中,系统产生气泡,出现强吸收峰.不知道你的系统是否有在线脱气装置.

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  • 第18楼2005/11/22

    很有可能就是柱子没有平衡好的问题！你的流动相比例变化太大，平衡时间短了肯定不行。一般情况下换比例之后得过10分钟左右基线才会有大漂移，才表明柱子里头的流动相刚达到你想要达到的比例。

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  • 第19楼2005/11/25

    我没有看明白

    俺要饿补一下中文。

    hxjiang 发表:请教一下，最近做的HPLC，为反向柱，紫外检测谱存在这样一个现象，同一个样品有时测出结果是：保留时间0-5 无吸收，5-15有两个尖锐的吸收峰，20-25一个吸收峰；
    但有时结果变成：保留时间0-5 强吸收，5-15无吸收峰，20-25一个吸收峰不变；
    这是怎么一回事？是仪器原因，还是我的样品自身存在变化呢？
    忘高手多多指点！！！！

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  • 第21楼2005/11/26

    我以前碰到过一个类似的情况，希望对你有所帮助。以前我分析胰岛素，用普通C18柱，孔径100A分析，结果重复不出来。后来发现，对于分子量大于2000的物质来说，适于用孔径300A的柱子分析，因为孔径太小使高分子物质保留不完全，重现性不好，结果，换了一根孔径300A的柱子就完全不一样了，重现性良好。从你所给的梯度来看，应该是进行肽图分析，分子量应该较大，换一根孔径较大的柱子试试。
    另外，对于小分子多组分的混合物，我同事也碰到过类似的情况，后来发现主要是柱子的问题，换一根性能良好的柱子，结果马上理想了。对于液相来说，柱子是非常重要的。

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