有水有渝兄,我已经把图谱传上来了,请再指教指教?

应助达人

色谱柱前处理的流动相比例，楼主有什么依据吗？不同柱子使用的流动相不一样吧？还要考虑使用的流动相是什么。
有点不明白的，想向楼主请教，为什么接ms的lc在前处理要用0.3ml/min？一般不是接ms的使用时是1ml/min。你用0.1ml/min,而LCMS要和使用时的流速一样？

新柱要用65%乙腈水冲有什么依据没？后面冲2-8小时有必要这么久？有什么作用或好处？
我自己接到新柱都是直接用无盐的乙腈水平衡20分钟就开始用了，不知道这样会不会对柱子造成伤害？

实际上LZ的做法是罗嗦，一般一根新柱子拿来后就是要先活化好，用100%的甲醇冲下就行了，然后用完后按照常规的步骤处理柱子就行啦，完全没必要那么麻烦。

我对柱子再生时，没用四氢呋喃，而是用的25%异丙醇，流速0.2ml/min,其他的和楼主一样，效果挺好的。

反冲的时候要注意是在低流速冲洗。如反相C18柱，如果怀疑是蛋白堵了，可以用1%的醋酸水：乙腈=90:10，长时间冲洗。如果不行，可以用同样的流动相长时间反冲，流速设为0.05ml/min，同时可将柱温升至50~55度。还是不行，把柱子末端打开，换一下柱顶头的滤芯，同时要注意尽可能地减少柱填料的丢失。最后一步是真正的死马当活马医

楼上这种开柱子换滤芯的方法绝对是死马当活马医，搞不好柱子就彻底废废了。所以不到万不得已，还是不要尝试的好。

色谱柱清洗那部分有点疑问，实验完之后用蒸馏水清洗色谱柱所占的比例比较高，而且流速也比较大，冲洗时间也比较长，难道不会把柱子冲塌吗？

应该不会的,你要观察压力啊.只要压力不是太高.就不会冲塌!

反冲是可以的，但不可以大流速冲，那样的话，很可能造成柱子，塌陷。