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wsy18
第73楼2017/11/27
这个分析得到位，这种冲洗方法一定要记住。
plexu(plexu) 发表:用一个不是很恰当的比喻，C18的填料看起来像许多网球，C18链则像一些绒毛附在填料的表面。这些填料像一些所有表面都在颗粒内部的一块含有6-15nm直径小孔的海绵。C18链的表面与固定相键合在小孔的里面，一小部分裸露在固定小填料的表面，所以这些小孔是非常疏水的。在正常的操作中，水-有机溶剂流动相进入小孔中且完全润湿固定相。分析物的分子分布于细孔的内外，并通过与固定相的相互作用被保留在色谱柱上。当流动相被水替代后，水分散到小孔中，那么有机相被水稀释了，可是水的极性太大了，以至于不能渗透到键合相，不能很好地起到冲洗固定相的作用。当所有的有机相从小孔中被赶走以后，相对于键合固定相，流动相（100%水）极性太大了，它会被推出小孔外，这些在非极性颗粒表面凝结的小水滴就像在停车场里一个油点上的水珠。这种现象发生的时候，即使你用一天的时间冲洗，色谱柱也不会得到清洁。同时，当有机相重新加入时候，则需要更长的柱平衡时间。
这种从色谱柱填料细孔中将水排斥出去的过程为“去湿化”。过去我们称之为“固定相”塌陷，其实固定相没有真的塌陷，只是它把水从固定相颗粒的细孔中排出在外。有些色谱柱可以被100%水冲洗，而不会被“去湿化”。这些色谱柱中嵌入了极性固定相，有时称之为“AQ”柱或与水匹配的色谱柱，由于色谱柱中含有足够的极性固定相，可以使用100%水。
更好的冲洗方法
比较好的冲洗色谱柱的方法是首先用水替代流动相中的缓冲溶液，例如，用60：40的乙腈-水替代60：40的乙腈-缓冲溶液，然后冲洗5-10ml，即可将大多数的缓冲溶液冲洗干净。然后再转换到100%有机相，在这种情况下是乙腈。进一步冲洗10-20倍柱体积，即可将强保留污染物从色谱柱上冲洗下来。色谱柱可以保存在这种有机溶剂中，装在LC系统上或取下来塞上端塞保存都可以。以上冲洗程序适用于所有反相色谱柱，不论是C8、C18，还是苯基、氰基或其它极性键合色谱柱