快乐
第17楼2010/08/20
这是我看到的一个帖子,引过来。
因小失大实例1:多孔板检测仪的重现性
不少同志经常抱怨自己多孔板检测仪(有的叫酶标仪)检测结果重现性太差。标准差太大,有的超过均值,甚至怀疑仪器有问题。我提示其用溶解试剂或纯水作为空白对照单独检测几个复孔,检测下来,重现性确实很差。这是为什么呢,是仪器的问题吗?不见得。
大多数因为加样不准确引起的。有一次,为了节省蛋白定量试剂(GE Amersham的2D-Quent),我改用多孔板检测仪进行检测(每个样品检测试剂从1ml节约到200 ul),标准曲线做得很好,除了极端的一点,其余均在一条直线上。摸好条件后,就在组内推广,结果只有少数成员能重复。仔细观察下来,发现问题在于加样,要么样品没有完全加入孔底,有的挂于壁上;有些样品加进去了,但是有气泡;要么加样就不准确,加200 ul,有的可能只有190,有的可能有210 ul,有移液器的技术不过关的原因,也有的是平时不注意保护移液器;多孔板检测仪的光源照入是纵向的,从液面射入,孔底出;或从孔底射入,液面出。因此液面的高度就是重要的影响因素,同质样品,液面高度不一样,吸光度也就不一样。分光光度计没有这样的问题,因为它是横向照射比色杯的,比色杯横径一定,所以不会有吸光度大的偏差。