楼主，梯度是甲醇从低浓度向高浓度升高，你一开始的方法是对的，但是50min以后要把比例调为梯度最开始的比例（C5%，D95）51min到60min走十分钟。不然的话你下次进样开始三分钟其实管路里都是C100%，所以样品三分钟就被甲醇带出来了，你的负峰是C从100%立刻变为5%引起的。

你用 乙腈：1%乙酸 280nm 进样量：5ul. 安捷伦(250nm*4.6nm) 5um
时间    乙腈    1%乙酸
0.01    5    95
8    5    95
20    15    85
41    35    65
48    35    65

先看看结果 不行你在调整一下极性比例

“一般出倒峰是因为样品里面有有机盐的存在，这些物质的紫外吸收比流动相更小，所以会有倒峰，但是一般这种盐几乎没有保留，都在溶剂峰处出峰，不会影响样品分析”，问一下，是只有有机盐会这样吗？无机盐会不会导致出现倒峰呢

样品浓度太低了吧!!把浓度提高点试试!!

各位好，经指点调整了流动相比例，这次是甲醇递增，乙酸递减的，倒峰问题不大了，但为什么乙酸比例超过50%后，线就跑上边去了呀？怎么变平啊？