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  • SS

    第31楼2010/10/29

    不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
    如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
    建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
    降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
    SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
    SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。

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  • i_am_ling

    第32楼2010/10/30

    可以通过改变其他条件来降低电流,比如降低电压,降低缓冲溶液的浓度等

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  • cyljoa

    第33楼2010/11/01

    楼主说的好详细,先谢谢啊。
    我的药物就是水溶液比较好,有人建议我用盐析辅助液液萃取,我尝试了下,但还是不理想,不知是不是哪里操作有问题:
    50ul空白血浆+10ul药物+10ul内标+50mg硫酸钠+0.5ml二氯甲烷-异丙醇,混旋10s,有沉淀产生,然后在3000r/min下离心5min,得到上清液于另一离心管,挥干,溶解,进样。检测发现还是有内源性杂质影响分离。我在想是不是我得到的这个上清液中含有水相,是不是还应该再离心一次,使水相和有机相分层。
    另外,我之所以加这么多SDS,是想增强荧光强度。增加检测灵敏度。

    SS(wangsl911) 发表:不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
    如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
    建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
    降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
    SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
    SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。

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  • i_am_ling

    第34楼2010/11/08

    讲的很详细,学习了!

    SS(wangsl911) 发表:不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
    如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
    建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
    降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
    SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
    SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。

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  • sunpengwjh

    第35楼2010/11/15

    回答的很详细,希望您继续来论坛指导大家!

    SS(wangsl911) 发表:不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
    如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
    建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
    降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
    SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
    SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。

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