流动性需要改善，你只是做了检测，并没有对方法进行研究！

1、建议做好前处理工作，柱层析下来的样品，最好浓缩后，换成液相可以使用的溶剂溶解样品并过滤；
2、如果有条件的话，建议过个SPE小柱，避免你样品里的重金属离子和其他杂质影响柱子；
3、还有，如果你切下来的一段样品太过于复杂，那么只能通过增加梯度洗脱的时间来提高样品分离的程度。
4、如果你手头有5-10cm的小柱子，可以走个简单的5-95%的梯度，流速尽量大一些，梯度时间加长，做好前处理工作，这样你能够比较好的看清样品组成。

不知道你的样品是什么东西溶解的
感觉满奇怪的，有可能是溶剂效应

流动相：A—水 B—甲醇
0min 0%A 100%B
8min 0%A 100%B
8.01min 15%A 85%B
13min 15%A 85%B
15min 100%A 0%B

will be better

感觉还是你的东西太杂了，虽然加大进样浓度看起来基线没有升高，但其实际是跟几个主峰成比例升高了，个人觉得还需要进一步分离提纯

应助达人

楼主做一个空白看看是样品引起的基线波动还是梯度引起的，做这个不使用对照品，只是归一法看一下出峰吗？8-13分钟这一段洗脱的都不要了吗，如果要的话这个直接跳跃式的梯度肯定是不行的。建议把色谱柱用梯度多清洗几遍，拿一其它物质先测一下柱效，看色谱柱是否正常，还有你的梯度方法使用的流动相你优化过了吗，做过0%-100%的梯度结果谱图是怎么样的，色谱峰形好吗？感觉上流动相的组成可能也不合理。

这样做是为什么啊？这样的话，不是极性越来越大，流动相洗脱能力越来越低了吗？

样品用什么溶剂溶解的？我感觉溶剂选择不是很好，换种溶剂试试，还有你可以考虑加点磷酸试试，0.1%就行。

样品是用甲醇溶解的，什么是溶剂效应啊？

前面的那段峰，我是不需要的，也就是在11min左右之前的我都可以不用考虑。
之前我做过0%-100%甲醇的梯度洗脱的，图如下：

另外，在做完样品之后，也做了一个空白，图如下（当时没再重复，也不知道4-6min的那些波动是不是残余的样品）：


结合这些图，各位再帮忙分析分析下，谢谢大家！