请为你是做什么抗生素，是四环素类吗？如果梯度、柱温、标液的溶剂、pH等对你的峰形影响都不大，那么换个保护柱试试吧，也许效果会很明显。

出现这种情况，最好首先考虑柱子是否过载，先降低10倍浓度进样试试。另外看看峰高。如果不过载，考虑流动相需作调整，根据目标物的性质决定调整方法。