我接触的都是新的仪器，跟傻瓜机似地，操作十分方便。基础知识基本不会。呵呵。

<继续写实验记录>



　　在确定用液相色谱法后，就按国标要求准备试剂。参考GB/T5009.29，流动相应为5：95的甲醇：0.02M醋酸铵溶液，按着这个比例就能做成功实验，不过本着“人生就要不停折腾”的精神，我花了不少时间把各个条件都折腾了一遍，折腾才有进步，进步就是快乐。如果要问如何学习做色谱，我想的就是，首先要有人带进门，但是在进门之后，就只能靠自己学习，要多做方法细节的调整，不断地比较结果并反推原因。

　　我在这台LC－6A液相色谱仪上的第一个项目是BHA、BHT，但那是接着别人的方法完全摹仿，真正开始对液相色谱实验有个大概的了解和掌握，就是在对苯甲酸、山梨酸液相条件的各个细节的不断调整中才开始建立的。可以这么说，该折腾的不该折腾的地方都折腾了一遍，我的液相色谱基础也就是这样打下的。

　　做液相肯定要用流动相，先想一想为什么要用甲醇。

　　我们都知道配流动相最常用的有机试剂就是甲醇、乙腈。自己试过好象两种用起来也差不多，不过甲醇便宜很多啊。虽然现在的液相方法有不少用乙腈，但是当年基本都是以甲醇为主。

　　另外，不少书上也有讲可以用四氢呋喃，但同时却说了四氢呋喃里往往会加稳定剂，我对于那个稳定剂多少有些不放心，谁知道对实验有什么副作用。不过后来自己我也试过用四氢呋喃作流动相，直观的区别就是压力不一样，但是峰形和分离好象无异样。想到那个稳定剂，还是不用算了。　　

　　使用甲醇应该有两个作用。一个是防止流动相里长细菌，尤其在南方天热时，很快就会长霉菌，液相色谱柱进多了霉菌很快就完蛋，甲醇有杀菌作用，使细菌在流动相中无法生存繁殖。另一个作用是保护柱填料。

　　不是所有的有机溶剂都能保护好填料，我试过不少试剂做流动相，除甲醇、乙腈、四氢呋喃外，还试过用乙醇作流动相，这么试的人可能不多。当时整个仪器室都是浓浓的酒香，虽然乙醇对人无害，也能杀菌，但是却对柱填料不利，很快这根柱子就完蛋了。我还不死心，又换了一根，又很快完蛋了，估计与乙醇的弱碱性有关吧。这算是我做过的比较失败也比较奢侈的尝试了。

　　乙醇作流动相有些其它特点，这里再补充一下：乙醇的粘度很大，在液相上压力特别高。关于它抑制细菌的效果，我也专门做过研究，先配制不同比例的乙醇水，分别倒进平板里，在温箱培养几天后再看结果。发现10%的乙醇水可以杀菌，细菌基本杀没了，若乙醇比例在5－10%之间，可以抑菌而不能杀菌，5%以下的乙醇水就没什么效果了。

丁丁老师开始写液相了哈，继续学习。有个疑问，丁丁老师，既然10%乙醇水细菌就基本杀没了，那为啥消毒都用75%酒精呢？

乙醇是显弱碱性的吗？呵呵，之前一直认为是弱酸性呢

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　 有一个杀灭速度的问题，乙醇水的杀菌实验的结果是在温箱里培养几天后再看的，而注射消毒需要马上有杀菌效果，等不了那么长时间啊。。流动相中的10%乙醇是个最低值，不是最佳值。。

呵呵，原来如此，受教了

对国标我基本上是深恶痛绝的。

<继续写实验记录>



　 配制流动相的水也是一个值得研究的因素，因为大多数流动相都要用到水。

　　我们的液相色谱仪比较幸运，隔壁房间就有一台MILLIPORE的纯水机，不用头疼哪里找纯净水的问题，平时需要用水的时候提瓶一接，放心又方便。只在纯水机出故障要修理的时间就没有办法了，我就试着用小瓶装的怡宝纯净水代替，效果不错。在用怡宝之前还不太放心，于是就倒了几个平板测一下细菌值，过几天从温箱里拿出来看，只有个别平板上长了几个细菌斑，多数平板很干净，实验表明小瓶装的纯净水还是可以用的，不过，要注意随用随开，开了瓶后放长就又会长细菌了。

　　由于对水中会长细菌这一因素的顾忌，我在后来的液相实验中，尽量回避在液相相瓶中放纯水，虽然乙醇上有些实验方法是把纯水当成是一个梯度单元，而且从理论上来说，如果能每日更换纯立也不会有太大影响。但是，我们要考虑到我们在实验过程中可能犯错的几率，以及出错后的后果。换水是件小事情，今天会记得，明天能记得，不代表后天也能记得。我自己能记得不代表别人也能时时记得，所以在建立液相方法时，如果要用纯水的，尽量用5%的甲醇水代替，这样就从根源上杜绝了纯水瓶里长细菌的问题。

　　　还有一个细节，就是流动相中的缓冲盐。我们谁都知道，在做液相色谱时，流动相要尽量少用或不用缓冲盐，不仅是因为多数缓冲盐就是常用肥料，更容易长细菌，更因为怕缓冲盐在溶液中析出结晶后，对柱塞杆有不良影响。所以在摸方法时，能不用缓冲盐就尽量不用，能浓度低一些就尽量低一些。

　　如果说我们杜绝不了缓冲盐这个液相实验中的有害但是必要因素，我们至少可以使它对系统的损害降到最低，这样因它出故障的几率也能降最低。　

　　液相做苯甲酸、山梨酸、糖精钠的缓冲盐是醋酸铵，由于它有析出后升华挥发的可能性，所以算得上是最温和的缓冲盐了。加入醋酸铵是为了调节流动本的离子强度，使待测物能保持良好的峰形。我也作过这方面的对比襂，在无缓冲盐的纯甲醇水体系中，苯甲酸和糖精钠的峰形良好，还可以检测；但是山梨酸的色谱峰峰形却呈破裂状时，只有在加入一定量醋酸铵后，山梨酸才能保持良好的峰形。

　　对于多数需测防腐剂的样品来说，苯甲酸、山梨酸是常规的联合检测项目，只测苯甲酸、糖精钠而不用测山梨酸的样品很少，所以这个实验是离不开缓冲盐的。

　关于流动相中缓冲盐的浓度，也做过具体的对比实验，0.02M、0.04M，0.08M均可，所以就选择0.02M的浓度。

呵呵，93年就接触色谱，当时国内才兴起色谱分析的吧，应该是业内的前辈了^_^

气相色谱实验记录模板，有吗？