三． 色谱柱的维护

1. 色谱柱的平衡　　
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！
操作步骤：　　
a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡)　　
b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。

2． 色谱柱的再生　　
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。　　　　
建议用来冲洗柱子的溶剂体积：　

2． 色谱柱的再生　　
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。　　　　
建议用来冲洗柱子的溶剂体积：　

色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 　　
125-4mm 　 1.6mL 　 30mL　　
250-4 mm 　 3.2mL 　 60mL　　
250-10mm 　 20mL 　 400mL 　　
选择再生方法：　　极性固定相(如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料)的再生：　　正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**　　非极性固定相(如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等)的再生：　　 水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水

注意：　　
a. 在对-NH2改性的色谱柱进行再生时，由于-NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1mol/L的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 　　
b. 0.05mol/L稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05mol/L稀硫酸冲洗非常有效。

3. 色谱柱的维护 　　
a．使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)　

3. 色谱柱的维护 　　
a．使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)　　

b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

c．避免流动相组成及极性的剧烈变化