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第11楼2013/06/25
1.(不接柱子)准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇,冲洗色谱仪器系统15-20min,保证仪器系统管路干净。(新柱老化前,此步决不可忽略)
2.(连接柱子)用水-有机相(10:90~5:95),以0.3~0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相(95:5→0:100)梯度变化,以0.3~0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂,以0.3~0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗1h以上。(目的是老化色谱柱)
3. 在平衡前根据水相-有机相的比例,首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例,以1ml/min流速冲洗30左右(目的是相平衡过渡)。如果流动相中含有缓冲盐,决不可在柱老化后立即用流动相平衡,必需先用90%以上水进行预平衡30min以上,否则,会导致缓冲盐在柱内析出结晶,严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
4. 由于是新柱首次使用,在进样完成后需立即对色谱柱进行净化和有机溶剂饱和。方法是:用水-有机相(90:10~95:5),以0.6ml/min流速冲洗1h以上→再用水-有机相(90:10~95:5),以1ml/min流速冲洗30min以上(或者采用溶剂梯度变化至100%有机相冲洗120min以上)→最后用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗1h以上。若流动相中有缓冲盐,建议用100%水冲洗1h以上后,再重复上述净化程序。
5. 在新色谱柱使用几次,均正常后,运行完毕净化处理程序可简化为:用水-有机相(90:10~95:5),以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%有机溶剂,以1ml/min流速冲洗30min以上→选择柱说明书中保存条件(Storage Conditions)规定的保存溶剂(Storage Solvent)冲洗10倍柱体积以上→封口,保存。