强烈建议溶剂用流动相试试

应助达人

大的好像是溶剂峰

我碰到过好几次，但一直没敢用两个峰，要么减小进样量，要么稀释后进样，总之出一个的时候在定量

杂质峰呀，纯化样品就解决了

样品要处理的，而且测样前要让柱子在流动相中充分平衡后才好

对照品最好还是用乙腈溶解，不建议用甲醇溶解，如果是两个峰的话，主峰和杂质峰有良好的分离度的话，也是可以的，主要不影响定量的话就可以，但是要对比空白样品中的出峰情况，排除杂质峰是否为目标化合物中的杂质，不建议改变液相条件使两个峰调整为一个主峰，这样掩蔽了杂质峰，且最低定量限会受到较大干扰！

对于反相HPLC来说，乙腈是个好东东，因为它惰性很好，一般不会与样品起反应；但是它也有不好的一面，就是容易出现溶剂效应。看楼主的图谱。主峰2.5min就出了，对硝基苯酚可能比价容易有溶剂效应的，不过需要做实验确认。

关于主峰后面的小峰，应该不会是手性异构，那会不会是其他异构或杂质，或者像楼主所怀疑的羟基电离的 产物，只要做一些实验就好了。首先，最容易的就是确认是不是电离的产物，可以先查一下对硝基苯酚的pKa，然后把流动相的pH调至比它的pKa低或高2个点，那么它就完全电离或者是完全没有电离，这时如果还有这个峰，那就不是电离产物，反之就是。如果查不到它的pKa，就直接多调几个pH的流动相试试也行。然后就可以确认是不是其他杂质，需要做的是得到对照品，然后定位看看。不过楼主可能不需要做这个，因为楼主的目的是做含量，能确定那个峰是不是电离产物就ok了。

前面那个事溶剂峰，不必过分纠结，否则无法正常实验。

应助达人

把这两个峰用面积归一化算一下，看看大概是多少。应该不是大问题。前面的负峰试试用流动相定容样品应该就会改善。

你用什么物质溶解的纯品，就测什么物质