应助达人

楼上是什么行业的？我也用PL Aquagel-OH柱子，mixed的，你用这个规格吗？

用PEG做标样？

是用的这个，8um，标样PEG和聚丙烯酸钠都做过。但是水相太麻烦了，一直做不好，主要是我们样品PH不定，流动相PH很不好搞，很挫败，都不知道自己做的可信不可信

应助达人

考虑到样品中有0.3M的NaCl是有点高的Cl根对柱子和系统不是很好，流动相的pH怎么不好搞？不理解，缓冲液的pH还是比较好调，也稳定的，样品也用这个流动相来溶解，应该没多大问题。

多进几个，看看重复性怎么样，常用标样检查下保留时间又无偏移。

再教你个方法，你的这样品的盐分不是很高嘛。而且有个峰，你做的所有样品的这个峰看看是否重合，若重合很好，就没多大问题，样品间的比较就比较靠谱了。

但你使用的盐分太高，最好在不分析样品的时候用纯水冲冲。

骑乌龟去流浪(v2781583) 发表:是用的这个，8um，标样PEG和聚丙烯酸钠都做过。但是水相太麻烦了，一直做不好，主要是我们样品PH不定，流动相PH很不好搞，很挫败，都不知道自己做的可信不可信

样品是水溶性涂料，PH值从2-7的的都有，而且成为比较复杂，比如我用0.2MNaNO3+0.01M NaH2PO4，PH4.7左右，就没有办法对PH从2-7这个范围内的样品都适用，有的分布很小，PD1.2或者1.4这样子，但是有的又很大，PD3.7甚至6.0。我都不知道是不是用的流动相盐不对，还是PH不对，还是样品本身就是这样子，还是样品中的某些基团与色谱柱基质有了反应导致拖尾，还是别的什么原因。水相就是比有机相要麻烦啊，也没有有经验的人来一起做，都自己瞎鼓捣。突然发现他们送的其中一批样品可以用甲醇溶，正准备用甲醇试试，仪器又故障了，哎。。

应助达人

我的原则是能用最低浓度的盐浓度，前提是完全消除离子效应，pH不同是否会使样品变质，这个是最需要考虑的，否则关系不是想象中的那么大。

选择柱子也很重要。合适的柱子不好选，要知道你样品的可能范围，再选择，需要用什么相，不同体系用不同的柱子，在切换的时候要冲洗干净，防止污染。

柱子这个问题倒是不大。我就是怀疑pH影响了样品，因为样品最终的pH就是通过添加氢氧化钠来调节的，一批样品出来，pH都不一样，所以如果缓冲盐的pH与其相差太多，势必改变样品自身。所以怎么选缓冲盐，选一个缓冲效果对所有样品都适用的，我有点晕。

应助达人

是否可以考虑增加磷酸二氢钾的浓度？使流动相的缓冲能力提高，若觉得盐分太高，降低硝酸钠浓度呢？

若真怀疑pH的影响，可以做下在不同pH条件下，该物质的分布是否有变化。

样品本身进样才100,200ul，然后被流动相稀释。

所以不管进样前pH值是多少，样品进样后都会很快变成流动相的pH值。

如果样品出峰不对，要么换流动相pH值，要么换色谱柱。

还有种方法，加盐。这里的加盐指的不是提高缓冲液的离子强度。

值得一看看