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  • zhangxiuxi21

    第11楼2013/12/08

    有问题想请教大家,
    1、液质调节峰型的时候是不是只看驻留时间啊?我按照工程师说的50mm的柱子,0.1分钟的点数大概大概十二三调的驻留时间,可峰尖处还是会有分叉出现,不知道是什么原因?
    2、仪器的重现性不是很好,原因大概有哪些?
    3、Waters Acquity UPLC TQD 用Masslynx软件如何手动积分啊?
    谢谢

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  • craig040051

    第12楼2013/12/11

    0.1%的氨水换算成mol/L的话,大概是多少?

    然后X-Bridge柱子在pH11的条件下的寿命大概是多久啊?

    谢谢了。

    erge(lihouquan) 发表:现在耐碱的柱子很多啊!很多柱子的范围在2~11呢,我们经常用0.1%的氨水,用X-Bridge的柱子没问题。

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  • craig040051

    第13楼2013/12/11

    谢谢回复。

    醋酸铵(10mM)我已经试过了,多MS的响应的抑制还是很强的。

    有没有其他建议,多谢。

    yzulcl(yzulcl) 发表:不能加氨水,那就加醋酸铵,用氨水调节pH。
    很多时候,直接用醋酸铵(10mM)就能有很好的效果,都不需要用氨水调pH。

    不过,流动相里面用了盐,换流动相和清洗柱子要多费事、多花时间了。

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  • craig040051

    第14楼2013/12/11

    谢谢回复。这个应该和HPLC-UV不一样。

    由于我是用MS的负离子模式,所以需要增强目标负离子。我觉得碱性条件下应该是比较合适的。

    0.1%甲酸-水,这个我已经试过了,对于MS的响应的抑制很强。响应降低了好几倍。

    不知道有没有更好的建议。

    wanglaoji1984(wanglaoji1984) 发表:首先,对于用氨水是一个很正确的思路,如果氨水的PH不合适的话,尽量保证调到合适的范围。其次,如果不可以的话可以用10 mM的醋酸铵。再次,用个不合理论的方法,用0.1%的甲酸试试哦,至少它能在液相这块保证抑制酸性化合物的电离,我原来做的一个酸性化合物用0.1%的甲酸-水要比用纯水的响应高的多。

    所以我想说的是实践是检验真理的唯一标准,有些理论并非适合所有的方法。

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  • yzulcl

    第15楼2013/12/11

    应助达人

    既然 0.1%甲酸 和 醋酸铵(10mM)都试过了,那就还是用 0.1% 氨水吧。

    浓氨水是14mol/L,稀释1000倍以后就是14mmol/L,根据pKb=4.75,计算得出0.1%氨水的pH大约是10.7。

    换一个耐碱的柱子就可以,现在 pH 1-11 的柱子挺多的。如果还是觉得 pH 10.7 太高不放心,可以用醋酸铵和氨水的混合溶液,比如 5mmol/L醋酸铵+5mmol/L氨水,可以微调比例,使得 pH=9 ,作为流动相用在 pH 1-11 的色谱柱上面应该比较保险。

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  • craig040051

    第16楼2013/12/13

    谢谢回复。0.1%的氨水的摩尔浓度是14mM是吧?

    因为我的物质很多都带酚羟基,属于中性弱酸性的物质。

    现在正在考虑买Waters的xBridge的,之前是使用的Agilent ZORBAX 5u RX-C8, 150x2.1mm的柱子,分离效果一般,基本上勉强分离开来。如果换成xBridge的话是选择C18还C8比较好?

    谢谢。

    yzulcl(yzulcl) 发表:既然 0.1%甲酸 和 醋酸铵(10mM)都试过了,那就还是用 0.1% 氨水吧。

    浓氨水是14mol/L,稀释1000倍以后就是14mmol/L,根据pKb=4.75,计算得出0.1%氨水的pH大约是10.7。

    换一个耐碱的柱子就可以,现在 pH 1-11 的柱子挺多的。如果还是觉得 pH 10.7 太高不放心,可以用醋酸铵和氨水的混合溶液,比如 5mmol/L醋酸铵+5mmol/L氨水,可以微调比例,使得 pH=9 ,作为流动相用在 pH 1-11 的色谱柱上面应该比较保险。

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  • yzulcl

    第17楼2013/12/13

    应助达人

    色谱柱的效果这个我没用过,真不知道。
    不过酚类化合物,倒是有接触过,是用的0.1%甲酸的流动相,ESI-模式相应很好。

    个人感觉,酚类物质,用碱性流动相不利于得到好的色谱分离效果。

    之前,你用0.1%甲酸,质谱相应不好,可能是质谱参数没有优化,比如质谱仪本身的调谐,离子源参数的优化等。

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  • ins0mnia2010

    第18楼2013/12/15

    建议还是从最简单的源参数调整入手。

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  • ins0mnia2010

    第19楼2013/12/15

    流动相还是用乙腈水,不加其它物质

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  • craig040051

    第20楼2013/12/15

    谢谢回复。

    我现在在做20个左右的物质,其中包括对羟基苯甲酸脂类,雌激素类,烷基酚类,以及其他一些。使用流动近样分析的方式(不仅过柱子)比较了0.1%甲酸,0.1%乙酸,5mM醋酸铵,5mM氨水以及纯MQ这五种情况下MS的响应,结果是氨水条件下离子响应是最好的。

    之前用的柱子Agilent ZORBAX 5u RX-C8, 150x2.1mm,是在MQ和乙腈作为流动相进行分离的,有些物质的响应不好,同时分离效果也不是很理想。

    所以打算换一个耐碱的柱子,比如xBridge的柱子,想看看有没有人有过相关的经验。

    谢谢。

    yzulcl(yzulcl) 发表:色谱柱的效果这个我没用过,真不知道。
    不过酚类化合物,倒是有接触过,是用的0.1%甲酸的流动相,ESI-模式相应很好。

    个人感觉,酚类物质,用碱性流动相不利于得到好的色谱分离效果。

    之前,你用0.1%甲酸,质谱相应不好,可能是质谱参数没有优化,比如质谱仪本身的调谐,离子源参数的优化等。

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