主要影响因素我觉得可能来自流动相和色谱柱，流动相影响大的是pH，不是同一根色谱柱影响也很大，另外仪器不同也有差异

这个保留时间相差5min的两次实验相隔多长时间做的？色谱柱有没有换过？色谱柱平衡是否充分？环境温度变化大吗？

1、可能是柱子柱效差（即柱子不好）。
2、磷酸盐的PH值有关，太高或太低都对柱子有很大的影响。
3、流动相的微小差异也可能造成保留时间差异。
4、当然柱温也是一个因素。
5、有时候样品也是因素，比如样品的性质比较极端：强酸强碱等。
6、其他。