+关注 私聊
  • CEcret

    第11楼2015/01/07

    如果你已经尝试过pH9.3的borate buffer了,那么我个人估计这个pH 8.0 Tris也难以达到理想的结果。。。

1
    +关注 私聊
  • wy20071722

    第12楼2015/01/09

    最好的办法还是采用文献中提到的溶液,或者采用性质相近的溶液来做。做病毒的话核酸和蛋白壳体是不是容易分离?有保证壳体结构的要求吗?用SDS应该是不错的选择

1
  • 该帖子已被版主-nini2006加3积分,加2经验;加分理由:应助
    +关注 私聊
  • CEcret

    第13楼2015/01/12

    MEKC模式确实常用于纯度分析及疏水性有差异的分离。不过如前所述,你还需要考虑吸附的影响。

1
    +关注 私聊
  • 淋淋雨

    第14楼2015/01/13

    我通过CZE分离的就是两种蛋白结构的颗粒,因此壳体结构需要保持稳定,有篇文献中提到这两种颗粒的pI值分别是3.0和3.8,缓冲液采用的是pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液,18kV电压118uA电流,无涂层毛细管,另外加入了SDS和腐胺作为添加剂。按照前面一大神说的pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液就是50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。我现在的情况是除了腐胺未加、电流达不到118uA,其余条件都和文献一致,但还是很难重复出文献中的那个结果啊

    wy20071722(wy20071722) 发表:最好的办法还是采用文献中提到的溶液,或者采用性质相近的溶液来做。做病毒的话核酸和蛋白壳体是不是容易分离?有保证壳体结构的要求吗?用SDS应该是不错的选择

0
    +关注 私聊
  • 淋淋雨

    第15楼2015/01/13

    有篇文献中提到这两种颗粒的pI值分别是3.0和3.8,缓冲液采用的是pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液,18kV电压118uA电流,无涂层毛细管,另外加入了SDS和腐胺作为添加剂。按照前面一大神说的pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液就是50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。我现在的情况是除了腐胺未加、电流达不到118uA,其余条件都和文献一致,但还是很难重复出文献中的那个结果啊

    CEcret(v2812644) 发表:如果你已经尝试过pH9.3的borate buffer了,那么我个人估计这个pH 8.0 Tris也难以达到理想的结果。。。

1
    +关注 私聊
  • nini2006

    第16楼2015/01/13

    除非是top期刊,不然口碑一般、影响因子也一般的期刊重复不出很正常的。不过也没必要非得跟文献一模一样,只要按着文献的方法做能有个大概样子就可以了,然后再在这个基础上进行各种条件的优化。当然,你能先完全按照文献的方法来试吧,有时候一些很小的方法差异都可能导致结果差异很大,因为实验的每一步设计是有其道理的。

    淋淋雨(v2794111) 发表:有篇文献中提到这两种颗粒的pI值分别是3.0和3.8,缓冲液采用的是pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液,18kV电压118uA电流,无涂层毛细管,另外加入了SDS和腐胺作为添加剂。按照前面一大神说的pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液就是50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。我现在的情况是除了腐胺未加、电流达不到118uA,其余条件都和文献一致,但还是很难重复出文献中的那个结果啊

1
    +关注 私聊
  • wy20071722

    第17楼2015/01/14

    没有做过你的那个实验,我觉得你需要再查一下那个溶液到底是什么溶液,材料里面应该会有的。还有就算是文献中的电流也很大。你不一定要和文献完全一致,能分开就行了。换个角度来看,就是分离两个蛋白颗粒,对吧?

    淋淋雨(v2794111) 发表:我通过CZE分离的就是两种蛋白结构的颗粒,因此壳体结构需要保持稳定,有篇文献中提到这两种颗粒的pI值分别是3.0和3.8,缓冲液采用的是pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液,18kV电压118uA电流,无涂层毛细管,另外加入了SDS和腐胺作为添加剂。按照前面一大神说的pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液就是50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。我现在的情况是除了腐胺未加、电流达不到118uA,其余条件都和文献一致,但还是很难重复出文献中的那个结果啊

0
    +关注 私聊
  • CEcret

    第18楼2015/01/17

    腐胺是必须的,作用是动态涂层试剂,抑制吸附的。你不加,当然结果不对。

    这个可不像炒菜,你少放一样佐料,味道也不会差太多。。。。电泳里面,少一样东西有时候就会天壤之别。

    淋淋雨(v2794111) 发表:有篇文献中提到这两种颗粒的pI值分别是3.0和3.8,缓冲液采用的是pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液,18kV电压118uA电流,无涂层毛细管,另外加入了SDS和腐胺作为添加剂。按照前面一大神说的pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液就是50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。我现在的情况是除了腐胺未加、电流达不到118uA,其余条件都和文献一致,但还是很难重复出文献中的那个结果啊

0
    +关注 私聊
  • 隆美尔

    第19楼2016/01/18

    为什么你的电流这么大,是不是离子强度太高了?

0
  • 该帖子已被版主-wy20071722加3积分,加2经验;加分理由:一年 的 帖子了,给个赞!