淋淋雨
第14楼2015/01/13
我通过CZE分离的就是两种蛋白结构的颗粒,因此壳体结构需要保持稳定,有篇文献中提到这两种颗粒的pI值分别是3.0和3.8,缓冲液采用的是pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液,18kV电压118uA电流,无涂层毛细管,另外加入了SDS和腐胺作为添加剂。按照前面一大神说的pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液就是50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。我现在的情况是除了腐胺未加、电流达不到118uA,其余条件都和文献一致,但还是很难重复出文献中的那个结果啊
淋淋雨
第15楼2015/01/13
有篇文献中提到这两种颗粒的pI值分别是3.0和3.8,缓冲液采用的是pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液,18kV电压118uA电流,无涂层毛细管,另外加入了SDS和腐胺作为添加剂。按照前面一大神说的pH8.0的eCAP chiral high pH缓冲液就是50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。我现在的情况是除了腐胺未加、电流达不到118uA,其余条件都和文献一致,但还是很难重复出文献中的那个结果啊
nini2006
第16楼2015/01/13
除非是top期刊,不然口碑一般、影响因子也一般的期刊重复不出很正常的。不过也没必要非得跟文献一模一样,只要按着文献的方法做能有个大概样子就可以了,然后再在这个基础上进行各种条件的优化。当然,你能先完全按照文献的方法来试吧,有时候一些很小的方法差异都可能导致结果差异很大,因为实验的每一步设计是有其道理的。
wy20071722
第17楼2015/01/14
没有做过你的那个实验,我觉得你需要再查一下那个溶液到底是什么溶液,材料里面应该会有的。还有就算是文献中的电流也很大。你不一定要和文献完全一致,能分开就行了。换个角度来看,就是分离两个蛋白颗粒,对吧?
CEcret
第18楼2015/01/17
腐胺是必须的,作用是动态涂层试剂,抑制吸附的。你不加,当然结果不对。
这个可不像炒菜,你少放一样佐料,味道也不会差太多。。。。电泳里面,少一样东西有时候就会天壤之别。