从移动界面电泳衍生有等速电泳，从等速电泳衍生有区带电泳，但是等电聚焦哪里来的？我认为也是从等速电泳衍生来的。从pH角度可以衍生出pH梯度角度电泳，那么从温度角度可以有温度梯度电泳、从电导角度可以有电导梯度电泳？

1。因为你不做pI很高的蛋白，也不care出峰的时间，所以你看不出太多的差别。

2。加尿素，一是打开蛋白空间结构，而是增加蛋白溶解度

3。优化有各自的标准的，有的企业可能需要严格遵循beckman标准方法，有的比较灵活，就可以采用较短的聚焦时间。只要marker的线性和聚焦的峰形没问题就可以。

4。电压迁移，出口端溶液需要换成乙酸溶液。提供Ac-以供质子交换时候的电荷平衡。

聚焦时的电解液和迁移时的电解液是不同的，另外电压和时间也有不同

能解释下这里的电解液、电压和时间的差异具体是什么呢？谢谢~

聚焦时的电解液和迁移时的电解液是不同的，另外电压和时间也有不同

能解释下这里的电解液、电压和时间的差异具体是什么呢？谢谢~

《毛细管等电聚焦中使用的毛细管填充两性电解质，两端插入不同的pH的磷酸和NaOH中，过程是否类似于等速电泳pH梯度形成的过程？在毛细管两端是否需要添加封堵剂？

毛细管等电聚焦的过程分为：进样、聚焦和分离三个步骤。不知道大家在进样的时候目标蛋白是如何进样的：是混在两性电解质中进样还是单独气压进样？聚焦过程中marker与样品分别移动到等电点的位置，这个聚焦的程度是如何把握的？还有最后观察到的结果——推出的过程是电压推出还是气压推出的，这个过程有什么不同？》

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我做过一些protein的cIEF,试着回答一下:
1 cIEF 的pH梯度形成过程与IEF是一致的，都是在电场中电势的作用下，两性电解质（CA）即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，是否与等速电泳一致？这个没做过，不好说；
2 封堵剂是需要的，原因前面有人说过了，补充一下我认为也由稳定pH梯度和便于后面电迁移的作用；
3 进样方式我做的都是与CA混合上样的，单独进样也不是不可以，那么可能需要在进行一次聚焦，由于CE高效性，可能有点多余；
4 聚焦与否的问题及时是否迁移到相应等电点的问题，这个你可以通过marker 的线性回归系数的计算和对比聚焦时间的差异来分析；
5 推出的过程的话有几种可选，但电迁移是我认为目前最合理也最有效的方式，它的原理就在于两端的缓冲液的成分变化，聚焦时两侧分别为强酸和强碱，推出时变成强酸和弱酸。

瞎分析，说的不对的地方请各位指正！！！

关于尿素的作用，它主要就是要提高溶解度，防止吸附等。
但是，如果你做蛋白的等电点，尿素有个非常严肃的问题是它会改变蛋白的性质，从而影响你的蛋白的pI,原因据说是尿素会与蛋白中的Lys/His反应，从而使蛋白偏酸。我们实验室正在做这个。做完了我在详细说说！