CEcret
第11楼2015/02/04
有点糊涂了。。。你是要分离后收集么?如果这个是你的首要目的,那么CE的量是不足以让你收集的。在HPLC方法中,能够较好地保持蛋白原始形态的就是SEC,当然你可以很容易采用反相的手段分离HC,LC,但反相色谱是会使蛋白变性的,不存在收集后再分析的价值。
此外,cIEF的分辨率很高,所以会给出很多的charged variants的峰,你说的太复杂,不知道复杂到什么程度,能否上一张图我们看看。
lingyou
第12楼2015/02/04
是这样的,因为要制定一个企业标准,所以希望cIEF的谱图简单一些,好定量容易重现才好作为标准执行。现在cIEF十几个峰,分离度也不是很好,要把每个峰定量定性比较困难。所以就想能不能LC,HC分别进行分析,使谱图变简单。所以就需要将单抗还原然后分别收集LC,HC。
目前用巯基乙醇处理,SEC分析发现了很高的聚体峰;然后想巯基乙醇处理后加碘乙酰胺封闭二硫键,结果出现了沉淀。都没法回收LC,HC。所以求一个靠谱的能还原单抗收集LC,HC的方法,然后我再用cIEF检测。