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c18色谱柱如何测柱效
1.色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；


2.柱头有污染；

3样品超载；

4样品溶剂不合适；

5.柱外效应；

6化学或二次保留（硅羟基）效应；

7缓冲容量不足或不合适；

8重金属污染。
3.如何解决峰形拖尾的问题
A．与化学有关的拖尾问题

1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未

知化合物加醋酸三乙胺；

2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；

3．降低进样量至<1ug。
B．与色谱柱有关的拖尾问题

1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲

醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。

2．使用保护柱
C．与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽

1．进样体积过大，（通常≤25uL）；

2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应<20cm，内径为0.007″）；

3．检测器流通池的体积过大。
4．如何储存色谱柱
1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。

2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。

3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。

4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。

5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。
如何选择保护柱
怎样选择保护柱，但又不能影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁。对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的保护柱，那么就应选择2cm或3cm长的保护柱。保护柱越长，自然所装填的色谱填料就越多，则其越能避免污染物进入分析色谱柱的机会。当然，随着保护柱的长度加长，样品的保留时间会比使用短保护柱长。一般来说，保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。



保护柱的填料装填方式也很重要。目前有薄膜装填法的保护柱，使用过程很简单方便，而且可以在实验室中进行干装。但是，其最大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的保护柱所装填的色谱填料有限，只能提供有限的保护作用；不过也因为所装填的色谱料较少，保护柱的长度也较短，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。
另一种保护柱结构其实质是缩短了的色谱分析拄，设计方式上有直连式、手紧式或整体式。整体式设计是由色谱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候有色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的保护柱长度。手上紧即可。另外从保护柱结构又分为是否可以更换保护柱柱芯。可以降低保护柱的使用成本。
大多数人是根据色谱分析柱的填料选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。
对于选择保护柱的原则是：在满足分析分离要求的前提条件下，尽可能的选择

这个太有用了，感谢分享

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柱效和性能的测定一定程度上反映了柱的使用对象和适用范围。

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常见色谱柱性能和特点介绍（2013年更新）资料分享
一、高性能色谱柱
特点：柱效高，价格高，通用性好，使用寿命长，pH范围宽，一般这类色谱柱可用于解决一些疑难杂症，并不是平时经常使用的色谱柱。
1、NEW！！ 广州绿百草的ECOSIL C18-EXTEND 评分 90
美国生产，被广州绿百草引进，采用硅胶球聚合物包被技术，与菲罗门和资生堂采用了相同技术，pH1-12，

优点：因为聚合物涂层抑制了碱性溶液水解硅胶，所以可以承受一定的碱性条件，由于是硅胶球颗粒，所以柱效不错，比Xterra或者PSDVB这类色谱柱柱效好。同类型色谱柱单价最低，￥2700。

缺点：市场推广一般，知名度很低，聚合物涂层稳定性比较差，所以当涂层损失时，色谱柱会很坏被碱性溶液溶解，这也是其寿命远不及Xbridge的原因。另外涂层损失也会影响结果重现性。
2、Waters公司Xbridge 评分 90
2005年waters公司推出，杂化颗粒柱

优点：pH 1-12, 在高pH状态下，没有能与此色谱柱匹敌的，目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下（9-12）普遍寿命很短，如Gemini，资生堂公司Capcell，YMC Pro-C18，包括waters的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长，Zorbax Extend更是不堪。柱效与一流的硅胶柱相当，甚至有过之无不及，杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效，Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围，但是柱效低的问题无法解决，这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。在如此宽的pH范围，最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法（pH1-3, pH9-12），这样能得到更稳定更容易重现的方法，对酸性，中性，尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。

注：Waters UPLC色谱柱与Xbridge采用同类型填料，只是颗粒度是1.7um，所以不再重复。

缺点：价格高，平均每支￥7000多的，不是大多数中国客户可以接受的，大多数客户的色谱柱报废了主要是盐或者样品堵了色谱柱，因为这个原因，昂贵的Xbridge很有可能2-3个月就被客户报废掉了。
2、Merck Chromolith整体化色谱柱 评分90

Merck公司2001年推出，整体化色谱柱，2001年Pitticon Editors金奖

优点：高流速、低压力，可以快速分析样品，因为压力低，所以可以串联色谱柱以获得更高的柱效而不用担心色谱柱耐压问题，低压力是因为硅胶棒的大量中孔的存在，中孔的存在也让这支色谱柱不怕堵，在处理比较脏的样品的时候会优势很大（如中药），实际的寿命也因此延长。

这个色谱柱最大的特点是柱效高出峰时间快，特别适合之前分析时间超长的实验条件，目前很好的例子就是人参的指纹图谱，因为成分复杂，之前出峰要2个小时，现在用整体化色谱柱30min就可以分析完了（已经在省药检所做过测试），且不影响柱效，类似于UPLC，但不像UPLC那么容易堵。如果需要谱图，我可以免费提供。
缺点：规格单一，单价比较高，单价￥7000左右，所以通过串联获得更高柱效的方式显得比较奢侈。市场推广的并不是很好，知名度比较低。
3、Phenomenex公司Gemini 评分80

采用硅胶球聚合物包被技术。pH1-12，

优点：因为聚合物涂层抑制了碱性溶液水解硅胶，所以可以承受一定的碱性条件，由于是硅胶球颗粒，所以柱效不错，比Xterra或者PSDVB这类色谱柱柱效好。单价不低，￥3200。

缺点：聚合物涂层稳定性比较差，所以当涂层损失时，色谱柱会很坏被碱性溶液溶解，这也是其寿命远不及Xbridge的原因。另外涂层损失也会影响结果重现性。
4、资生堂 Capcell 评分70

采用硅胶球聚合物包被技术。pH1-10，

优点：其实采用了和Gemini同样的技术，只是参数指标比phenomenex低调。有非官方消息称其实是phenomenex购买的资生堂的该项技术。

缺点：市场推广远差于phenomenex, 单价偏高，￥5000以内。
5、Agilent Zorbax Extend 评分50

采用双配位键和相技术。pH2-11.5

优点：不详

缺点：在各公司的高pH使用时间测定表，基本上都会拉上Extend，大多数公司的数据都说明该款色谱柱的耐高pH能力很差，甚至不如一些高纯硅胶柱。单价￥5000左右。
二、高纯硅胶柱

特点：柱效高，普遍柱效在9-10万/米的塔板数，峰形好，适用广泛，价格合适，为各大色谱柱公司目前主流色谱柱，也是竞争最激烈的色谱柱，普遍在2000-3000的范围内！
1、NEW!! 广州绿百草公司的ECOSIL C18-SH 评分90

德国生产的色谱柱，工艺可靠，被广州绿百草引入中国，

优点：pH 1-10, 单价便宜，￥1900，通用性好，柱效高，测试报告中见过甲苯测出12万/米的塔板数

缺点：市场推广较差，知名度比较低。
2、Merck的Purosphere STAR 评分 90

优点：为Merck公司1999年推出，pH 1.5-10.5,单价￥2950，通用性好，柱效高，测试报告中见过甲苯测出11万/米的塔板数

缺点：市场推广较差，知名度比较低，压力较高，后来更新的色谱柱把压力降下来了，柱效也略有下降！
3、Phenomenex的Luna 评分 90

Phenomenex公司的主打色谱柱，主要是菲罗门直销，pH1.5-10，单价￥2600左右，

优点：通用性很好，在进口色谱柱市场上占有一定份额，

缺点：装填相对松散，柱头填料容易塌陷，价格也略有上涨。
4、Waters的Symmetry 评分85

优点：由于Waters推出Sunfire超纯硅胶柱，而降为低端色谱柱，但实际性能优异

pH2-8，属于很通用的色谱柱，目前促销价为￥2990和￥3450，相对于waters其他色谱柱，性价比还是不错的。柱寿命不错

缺点：因为是仪器公司的色谱柱，虽然做了特价，但还是较贵，另外柱压稍高。
5、Kromasil以及Hypersil ODS2 并列 评分85

两款色谱柱均为专业色谱柱公司提供，性能相当，Kromasil稍胜一筹，单价￥2300左右

pH2-8，属常规色谱柱，通用性不错，都是由代理公司销售，没有技术附加分，全靠价格取胜。故评分85

相对来说Hypersil的BDS和ODS2性能稍逊，主要是属于A类硅胶，会容易拖尾，不过thermo近期的促销价格非常低，价格已经降到了1700以下，所以现在购买已经比Kromasil色谱柱更划算！
6、YMC Pro C18 评分80

性能不错，较第四名性能优异，被多家公司挑选进行性能比较，只是目前的YMC产品为代理公司销售，热衷销售更低价格的ODS-A，所以Pro C18市场占有率很低，

缺点：销量决定价格，目前售价在￥4000以上。
7、Agilent的Zorbax XDB以及岛津的Shim-pak并列 评分75

性能一般，只是因为是由仪器公司直接销售，销量还是有保障的，售价较高，Agilent大约￥4000-5000，岛津大约￥3000-4000。

缺点：性能普通，单价稍高。技术多年没有更新。
8、Waters的Sunfire 评分60

Waters最新超纯硅胶色谱柱，为二官能团封端，峰形更尖锐，此外性能较其它高纯硅胶柱并无明显优异，比如Purosphere STAR、Symmetry以及Luna等，单价￥6000-7000，单价太高，性能并不突出，所以在国内一般只能依靠Waters仪器捆绑销售。

缺点：单价太高
9、Inertsil ODS-3色谱柱： 评分 90

优点：日本GL Sciences公司经典的高纯硅胶柱，峰形好，通用型好，理论柱效需要超过8.8万/m才可出厂，与LUNA，SYMMETRY性能相当，

价格￥2400-2500之间，随着岛津GL在中国投入的加大，销量已经增长很多，目前大概1万支一年，

缺点：在国内以分销为主，市场推广不够。
10、Inertsil ODS-SP色谱柱： 评分80

特点：日本GL Sciences公司经典的高纯硅胶柱，SP说明了它的特点，Sharp Peak，碳载量很低，可以运行100%水溶液，保留时间短，现在为岛津日本机型的标配色谱柱。

缺点：碳载量低会导致它对非极性样品的保留较弱，分离度会下降，价格在￥3500左右。
11、Lichrospher RP18e色谱柱 评分90

优点：默克公司的纯硅胶柱，且端基封尾，通用型较好，目前250*4.6 5u的色谱柱正在特价￥2000，性价比极高。性能与kromasil,hypersil色谱柱相当。

缺点：硅胶杂质含量相对较高，峰形会较高纯硅胶柱差一些，市场知名度很低。
三、亲水色谱柱，

特点：一般的C18都是疏水色谱柱，所以分析极性强的样品，都会保留比较弱，而调低有机溶剂比例又会造成疏水塌陷，所以很多公司都会推出不封端的或特殊封端的色谱柱，通过亲水基团达到增加极性样品保留，并且可以降低疏水塌陷的影响。

这类色谱柱一般都会用AQ或者Hydro表示，可耐100%水
1、NEW!! 广州绿百草的ECOSIL C18-AQ 评分90

优点：美国生产，耐100%纯水，性价比很高 ￥1900

缺点：知名度很低，
2、Waters Atlantis T3 评分90

采用三官能团键合，获得了很好的低pH稳定性，寿命提高，采用了专利的封端使其对极性化合物有良好的保留，并且对碱性化合物峰形也不错，

优点：很多公司的分析极性化合物的c18柱采用了不封端的技术，所以造成分析碱性化合物拖尾，并且柱寿命低，而T3在极性化合物的保留、碱性化合物的拖尾、柱寿命三方面都完成得很好，所以是这类色谱柱的No.1。

缺点：价格偏高，单价￥5000-6000
3、Agilent SB-AQ 评分85

优点：采用二异丙基空间位阻技术，碳链结构为专利（应该不是C18），所以在低pH下碳链难水解，低pH稳定性非常好，（SB-C18采用的是二异丁基位阻技术，是目前在低pH下稳定最好的色谱柱，只有waters的Xbridge能与之相比）单价￥4000-5000。

缺点：因为空间位阻影响，所以和SB-C18一样，无法封端，造成了缺点和优点一样突出，所以SB-C18碰到碱性化合物的峰形是非常差的，尤其是在pH7左右，另外在pH7左右这款色谱柱寿命也更差，所以一般适用于pH1-3。
4、phenomenex Synergi Hydro-RP 评分：85

采用极性封端，单价3000以下。
高纯硅胶柱（补充）
四、低价色谱柱（大多数客户的首选）

特点：一般价格在￥1000-2000之间，通用性好，低价但不一定低性能，是目前国内客户使用最广泛的色谱柱，尤其是制药企业的客户，因为拥有很高的性价比，用坏了也不用太心疼，所以目前国内市场至少有每年2万支左右的市场。
1、广州绿百草的ECOSIL C18色谱柱 评分100

优点：日本生产，绿百草引入中国，价格经济，性能优异可靠。属于高纯硅胶柱，柱压低，150mm的短柱65：35乙腈/水压力在2.5MPa左右。性价比很高，售价在￥1700。

缺点：知名度很低。
2、迪马钻石色谱柱 评分90

优点：属于高纯硅胶柱，柱压低，峰形好，尤其用于中药客户更有优势，目前与依利特并列为两大最常用国产色谱柱品牌，拥有这么广阔的市场，说明这款色谱柱是经得起考验的，售价￥1600左右。

缺点：质量控制较大品牌的原装进口柱差，批次重现性差，使用寿命短。
3、依利特色谱柱 评分90

优点：属于纯硅胶柱，拥有这么广阔的市场，尤其是制药企业客户，说明这款色谱柱是经得起考验的，售价￥1400-1500。

缺点：批次重现性差，使用寿命短，现在thermo的进口柱会对依利特有很大的冲击，同样的填料，进口的色谱柱价格也不高。
4、Kromasil国产色谱柱 评分80

优点：属于纯硅胶柱，拥有较多的客户，价格低 售价￥1000-1200。

缺点：批次重现性差，使用寿命短，阿克苏诺贝尔公司已经不供应中国市场5u填料，不过这几年应该还可以买到。