symmacros
第12楼2015/06/27
13. 我也推荐几个偷懒的方法
1. 做SDS-PAGE跑胶通常都是现配现用,但配胶要>1h,所以如果想第二天睡个懒觉而又不耽误跑胶可以于前一天晚上做好浓缩胶和分离胶,待凝聚后不要拔下梳子,把含胶玻璃板从制胶槽取下,用保鲜膜包上,注意玻璃板上下两边缘会有气体,所以需要加一点电泳缓冲液以避免胶内水分蒸发.然后放4度过夜.第二天直接拔下梳子行后续.国外好多公司出售脚既是如此,可以保存上星期。
2. 配置分离胶或者非变性胶时因胶凝时收缩可导致加样孔变浅.可以将加剩的胶放入4度以降低凝聚速度,而将凝胶放入37度促聚,并随时用4度加剩的胶补充下降的胶面.另外将胶横放与水平面成~10度角也可以减少收缩的影响。
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第18楼2015/06/27
21. 跑好SDS-PAGE胶的一些体会:
1. 清洗好玻璃板,不要偷懒,很多时候跑完电泳撬胶时会因为玻璃板不干净胶粘在板上把胶撬破。
2. 配胶时不要反复用枪混,稍微摇混就可以了,用枪混多次会导致胶凝不好影响电泳图的分辨率。
3. AP分装成500微升一管保存放-20度,避免AP用太久失效。
4. 倒胶时把玻璃板中的水用滤纸尽量吸干,因为微量的水存在会影响配的胶浓度。
5. 尽量不用过夜放室温或者四度的胶,也回影响胶 的分离效果。
6. 电泳完撬胶时根本不需要用撬胶板,在一平皿里装好水,把有胶一面的放在水中晃动几次胶很容易就脱落下来,一点没有问题,方便的很。
7. 点样时样品别忘了离心这步,因为上样含有固体沉淀会影响电泳图分辨效果。
8. 尽量在冰浴状态下跑。