-
+关注
私聊
-
beyond1977
第12楼2016/04/27
应助达人嗯，样品瓶液面高低对进样量的影响相对于毛细管电泳的重复性来说确实可以忽略，我们一般进样压力在0.5-1psi左右，大概3400-6800pa，即使液面高度差3mm也仅仅30pa左右，也就是1%的相对误差。3mm的高度差，除非是故意，一般是不太可能
wy20071722(wy20071722) 发表: 电泳 的 时候样品区带也会在毛细管中移动的，如果电泳时间较长，有可能导致样品区带进入buffer瓶。可以进行一个简单的实验，用紫外进样荧光样品（保证浓度和进样量），再把出口端fuffer瓶用于进样（或者反向冲洗+电压），看会不会有荧光物质。这时候是可以看到荧光峰的。我想插入buffer瓶主要是因为两端的液面高度差不多，保证没有什么压力差。而如果插入空瓶中，右端的毛细管出口端与左端的buffer液面是有高度差的（如果卡盒两段毛细管平齐，这个高度差一定会存在），导致毛细管中始终存在压力。
如果buffer瓶使用比较长的时间不更换，也会产生这种压力差。而如果使用比较大的buffer瓶，相同体积量的液体带来的高度变化比较小，可以使用更长时间。（仅从这一点考虑。）如果毛细管插入液面比较短，这个压力差其实会很小，如果远小于我们使用时施加的压力，结果上就看不出来差别。（具体压力可以以水为参考计算，但是我没有算过，从实验结果可以推断部分）
为什么说大部分时候看不出来差别，有时候也有问题，猜测是那个“有时候”毛细管太短，且毛细管插入液面较深。