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  • langyabeilei

    第21楼2016/05/17

    应助达人

    1、提取 将10 g 动物组织和20 mL 乙酸乙酯加入50 mL 离心管中,均质2 min ;4000 rpm 下离心5 min,然后将乙酸乙酯层移入100 mL 平底烧瓶中;20 mL 乙酸乙酯重复提取一次,合并乙酸乙酯,减压蒸馏至干。向烧瓶中加入4 mL 甲醇氯化钠溶液(甲醇/ 4% 氯化钠水溶液=30/70)和4 mL 正己烷,用涡流混匀器混合1 min,使残渣溶解。混合液转入10 mL 离心管中,振荡1min,4000 rpm 下离心3 min,弃去正己烷层,水层再加入4 mL 正己烷,同上操作,弃去正己烷层(除脂肪)。下层清液用PLS 柱净化。
    2、净化
    a 活化: 依次用3 mL 甲醇和3 mL 水活化ProElut PLS 60 mg/3 mL (Cat.#68003),流出液弃去;
    b 上样: 将待净化的样品液加入柱中,流出液弃去;
    c 淋洗: 用3 mL 20% 甲醇水溶液淋洗,淋洗液弃去,并将PLS 柱抽干;
    d 洗脱: 用3 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液; e 重新溶解:在40 oC 下用氮气将洗脱液吹至近干,然后用1 mL 40% 甲醇水溶液定容,供HPLC 分析

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