mengzhaocheng
第11楼2016/09/13
1、样品准备 制备3-5 mL 血清,低温保存,备用。取2 mL 血清,加入40 μL 磷酸,混匀,待净化。
2、净化
a 活化: 将3 mL 甲醇、3 mL 水依次加入ProElut PLS 60 mg/3 mL (Cat.#68003),流出液弃去;
b 上样: 将样品加入PLS 柱,流出液弃去;
c 淋洗: 5% 甲醇水溶液淋洗小柱,淋洗液弃去,然后将小柱抽干;
d 洗脱: 3 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液;
e 重新溶解:30 oC 下将洗脱液减压蒸馏至干,用1 mL 乙腈 2% 乙酸溶液(12 88)溶解,经0.22 μm 滤膜,HPLC 分析
吕梁山
第13楼2016/09/13
1、样品准备 制备3-5 mL 血清,低温保存,备用。取2 mL 血清,加入40 μL 磷酸,混匀,待净化。
2、净化
a 活化: 将3 mL 甲醇、3 mL 水依次加入ProElut PLS 60 mg/3 mL (Cat.#68003),流出液弃去;
b 上样: 将样品加入PLS 柱,流出液弃去;
c 淋洗: 5% 甲醇水溶液淋洗小柱,淋洗液弃去,然后将小柱抽干;
d 洗脱: 3 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液;
e 重新溶解:30 oC 下将洗脱液减压蒸馏至干,用1 mL 乙腈 2% 乙酸溶液(12 88)溶解,经0.22 μm 滤膜,HPLC 分析
色谱条件: 色谱柱:Diamonsil C18(2) 250 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99603) 流速:1.0 mL/min 进样量:20 μL 柱温:35 oC 检测器:UV 270 nm 流动相:A :乙腈,B :2%冰乙酸水溶液 梯度设置 从0min倒30min,流动相A从12%到25%;从30min到40min,流动相A为25%;从40min到41min,流动相A从25%到12%;从41min到50min,流动相A为12%。
牛一牛
第15楼2016/09/13
1、样品准备 制备3-5 mL 血清,低温保存,备用。取2 mL 血清,加入40 μL 磷酸,混匀,待净化。
2、净化
a 活化: 将3 mL 甲醇、3 mL 水依次加入ProElut PLS 60 mg/3 mL (Cat.#68003),流出液弃去;
b 上样: 将样品加入PLS 柱,流出液弃去;
c 淋洗: 5% 甲醇水溶液淋洗小柱,淋洗液弃去,然后将小柱抽干;
d 洗脱: 3 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液;
e 重新溶解:30 oC 下将洗脱液减压蒸馏至干,用1 mL 乙腈 2% 乙酸溶液(12 88)溶解,经0.22 μm 滤膜,HPLC 分析