应助达人

还真有问题请教老师，总结下，一起问掉。

应助达人

谢谢，好的，一起探讨交流。

应助达人

您好，老师，我现在需要开一个基因毒性杂质的分析方法，甲磺酸异丙酯，有没有好的GC或GCMS方法？

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我不是很清楚，好像要用碘化钠（含无水 硫代硫酸钠）水衍生生成碘代异丙烷后测定。

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参考：ChineseJournal NewDrugs 2014，23（11） 1326 中国新药杂志2014 年第23 卷第11
gc_MS法同时测定SIPI5357甲磺酸盐中3种甲磺酸酯
ChineseJournal NewDrugs 2014，23（11） 1326 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 〔作者简介〕王莉芳，女，高级工程师，主要从事新药制剂研究。联 系电话: 13831183488，E-mail: wanglifang@ csptc． com。 〔通讯作者〕 郭文敏，女，高级工程师，主要从事新药质量研究。联 系电话: 13833396197，E-mail: guowenmin@ csptc． com。 实验研究 gc-MS 法同时测定 SIPI5357 甲磺酸盐中3 种甲磺酸酯 （石药集团中奇制药技术有限公司，石家庄050035） 〔摘要〕 目的：建立同时测定SIPI5357 甲磺酸盐中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的方法。方 法：采用柱前衍生技术和gc-MS，按内标曲线法进行SIPI 5357 甲磺酸盐中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸 异丙酯的含量测定。结果：3 个杂质之间分离度均大于2． 0，线性范围为2． 99．9%，精密度 ＲSD 1%，检出限均小于0．375 ngmL 。结论：该方法简便、准确、快速，适用于SIPI 5357 甲磺酸盐质量控制和检测。 〔关键词〕 甲磺酸酯；测定；气相-质谱联用 〔中图分类号〕Ｒ927． 〔文献标志码〕A〔文章编号〕1003 －3734（2014）11 －1326 －04 Simultaneous determination threemethanesulfonates SIPI5357mesylate gc-MSWANG Li-fang，GUO Wen-min，YANG Han-yu，WANG Bing-lin （CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology Co． ，Ltd． ，Shijiazhuang 050035，China） 〔Abstract〕 Objective：To establish threemethanesulfonates SIPI5357me- sylate gc-MS．Methods：The three methanesulfonates were determined pre-columnderivation technology combined gc-MS．Ｒesults：The resolutions threemethanesulfonates were greater than Linearcali- bration curves were obtained over recoverieswere all greater than 99． 9% ＲSDsless than detectionlimits were all lower than 375ngmL Conclusion：Themethod simple，accurate，rapid，andsuitable determi-nation qualitycontrol SIPI5357mesylate． 〔Key words〕 methanesulfonate；determination；gc-MS SIPI5357 甲磺酸盐是新型多靶点抗抑郁 ，属于国家1类新药，由于SIPI5357 甲磺酸盐 合成工艺中使用了原料甲磺酸、溶剂乙醇，因此 SIPI5357 甲磺酸盐产品中有杂质甲磺酸甲酯、甲磺 酸乙酯、甲磺酸异丙酯产生可能。烷基磺酸酯作为 潜在性基因毒性杂质，严重威胁人类健康，因此需要 控制药品中磺酸酯的限度 toxicologi-cal concern，TTC）评价大部分药物的 TTC 值为遗传 毒性杂质摄入量1． μgd，按照SIPI5357 甲磺酸盐 的初步拟定最大日服用量为 80 mg 计算，SIPI5357 甲磺酸盐中含甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙 酯的总量应不得过18． 75 ppm。 参考欧洲药典8． 版《甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯在原料药中的测定》 ，采用柱前衍生 、气相色谱-质谱联用〔10〕 ，对产品可能存在 的甲磺酸酯类经柱前衍生，生成碘甲烷、碘乙烷和碘 代异丙烷后进行检测，考察 SIPI5357 甲磺酸盐及使 用甲磺酸原料生成的中间体SIPI5357-1 中基因毒性 杂质甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的残 ChineseJournal NewDrugs 2014，23（11） 1327 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 加入硫代硫酸钠防止碘离子被氧化为碘单质：CH ＲI碘离子与磺酸酯发生亲核取代生成磺酸根与碘 代烷烃。 仪器与试药 QP2010 Plus 型气相-质谱联用仪（日本岛津公 司）；Turbo Maxtrix 16 司）；交联聚乙二醇毛细管色谱柱（安捷伦科技有限公司）。 对照品：甲磺酸甲酯（J． Baker．chemical． Co． ，批号：Lu 80127，含量：98． 3%）；甲磺酸乙酯 〔阿法埃莎（天津）化学有限公司，批号：10169291， 含量：97． 0%〕；甲磺酸异丙酯（赛默飞世尔科技有 限公司，批号：A031422，含量：99． 2%）；甲磺酸丁酯 （南京强山化工科技有限公司，批号：20110809，含 量：98． 5%）。 供试品：SIPI5357 甲磺酸盐〔石药集团中奇制药 技术（石家庄）有限公司，批号：SIPI5357-1，SI- PI5357-2，SIPI5357-3〕。 无水硫酸钠、碘化钠、无水硫代硫酸钠均为分析 纯；乙腈为色谱纯；水为去离子水。 方法与结果 2080（v 衍生试剂称取120． 碘化钠和60mg 无水 硫代硫酸钠，加水溶解并稀释至100 mL，摇匀，即得。 内标溶液精密量取甲磺酸丁酯 25 25mL量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量 取50 置10mL 量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度， 摇匀，精密量取1 mL，置25 mL 量瓶中，用混合溶剂 稀释至刻度，摇匀，即得。 标准贮备液精密称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯各25 mg，置5 mL 量瓶中，加甲苯 溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取50 μL，置25 mL 量瓶中，用内标溶液稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL 含上述3 种杂质各约10 供试品溶液精密称取供试品25 mg，置20 mL 顶空瓶中，分别加内标溶液与衍生试剂各0． mL，迅速压盖密封，摇匀，即得。 系统适用性溶液取标准溶液贮备液25 加内标溶液稀释至50mL，摇匀即得。 系统适用性分别取系统适用性溶液、甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯对照品溶液及供试品溶液，照上述 方法操作，顶空进样分析，记录质谱图，见图1 内标衍生物碘代丁烷的保留时间约为5．748 min，甲 磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的衍生物碘甲 烷、碘乙烷、碘代异丙烷的保留时间分别为2． 957， 631，3．920 min，各成分峰的理论塔板数均大于 20 000，各峰之间的分离度均大于 0，符合检测要求。 线性范围精密量取标准溶液贮备液 20，250 75，5，6．25 mL，分别加内标溶液稀释制含甲磺酸 甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯系列浓度的对照溶 液；分别精密量取上述对照溶液0． mL，置20mL 顶空瓶中，加0． mL衍生试剂，迅速压盖密封，置于 平衡30min 进样分析，记录 质谱图，结果见表1。分别以甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯的浓度为横坐标（x），分别以甲磺 Chinese Journal NewDrugs 2014，23（11） 1328 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯衍生后生成碘甲烷、碘乙烷和碘代异丙烷的峰面积与内标物碘丁烷 峰面积的比值为纵坐标（y），依次绘制标准曲线，3 个杂质的线性结果见表1。甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯均在2 625ngmL 范围内线性关系良好。 个杂质的线性结果成分 线性方程 线性范围甲磺酸甲酯 0700x 625ngmL 0518x 625ngmL 0127x 625ngmL 回收率精密称取已知甲磺酸甲酯、乙酯、异丙酯含量的 供试品25 mg 份，置20mL 顶空瓶中，精密量取浓 度为150，750，1． 125 ngmL －1 的标准溶液各0． mL，加入样品中，加入衍生试剂0． mL，迅速压盖密封，制成含甲磺酸甲酯、乙酯、异丙酯浓度分别为低、中、 份。照上述方法操作，记录质谱图，并计算回收率，结果表明，本方法准确可靠。 见表2。 回收率结果成分 回收率/ 低浓度中浓度 高浓度 平均值/ 甲磺酸甲酯101． 66 99． 35 99． 89 100． 甲磺酸乙酯99． 37 100． 25 98． 98 99． 53 甲磺酸异丙酯 98． 69 99． 47 100． 36 99． 51 精密度精密量取15 mgL －1 的标准溶液0． mL，置20mL 顶空瓶中，加入0． mL衍生试剂，迅速压盖密封，置 平衡30min 进样分析，记录 质谱图，测定溶剂峰的峰面积，平行测定6 份，计算 精密度，结果见表3。 精密度结果编号 24．48 20． 21 24．09 20． 47 24．31 20． 45 24．40 20． 31 24．06 20． 38 23．95 20． 52 94平均值 24． 22 20． 39 96ＲSD/ SIPI5357样品，照上述方法进行操作，测 定样品中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的 含量，平行测定6 次。结果表明，本方法重复性良 好，满足测定要求。见表4。 重复性结果编号 甲磺酸甲酯/ ngmL 甲磺酸乙酯甲磺酸异丙酯 033未检出 未检出 037未检出 未检出 036未检出 未检出 034未检出 未检出 036未检出 未检出 037未检出 未检出 平均值 定量限与检测限取线性范围测定项下最低浓度水平溶液，加内 标溶液逐级稀释后进样分析，以信噪比约为10 1时的溶液浓度作为相应甲磺酸酯的检测限，结果甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的定量 限分别为0． 037 5，0． 375 0，1． 875 ngmL ；检测限分别为0． 003 75，0． 037 5，0． 375 ngmL 。以上结果表明，甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的 定量限和检测限均远低于各杂质的控制限度，满足 测定要求。 样品测定照上述方法测定3 SIPI5357甲磺酸盐中试 产品，其甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的 含量测定结果见表5。 SIPI5357甲磺酸盐的3 个杂质检测结果 批号 甲磺酸甲酯 038未检出 未检出 SIPI5357-2 035未检出 未检出 SIPI5357-3 036未检出 未检出 甲磺酸酯类杂质具有遗传毒性，属于欧洲药品管理局（EMEA） 中明确要求药品中应严格控制的Chinese Journal NewDrugs 2014，23（11） 1329 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 杂质，由于本研究药物为1类新药，其最终日服用量 还有待根据临床试验来确定，因此本研究根据 SI- PI5357 甲磺酸盐的初步拟定日服用量确定甲磺酸 酯类杂质限度，从而建立了对产品中甲磺酸酯类杂 质准确可控的检测方法，但本方法学中各项指标设 定范围较宽，将来剂量的调整不影响方法的使用。 本研究采用 gc-MS 和柱前衍生的方法成功地 实现了SIPI5357 甲磺酸盐合成过程中有可能产生 的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯等毒性杂 质的有效控制，对临床样品 SIPI5357 甲磺酸盐制剂 的安全性、有效性、质量可控性起到了保证作用。 因本品理化性质原因，溶解性较差，在溶剂筛选 中分别选用了甲醇、异丙醇、二氯甲烷、乙腈等溶剂。 结果表明，选用混合溶剂去离子水 芳烷醇哌啶类化合物的合成及抗抑郁活性研究〔J〕． 药学学报，2010，45（3）：324 －329． ZHENGYY，XIE P，XING LX，et al． Development practicalsynthesis triplereuptake inhibitor，（1Ｒ，2S）-SIPI 5357〔J〕． Process Ｒes Dev，2012，16：1921 －1926． 1-丁基-2-羟基芳烷哌嗪衍生物及作为抗抑郁剂应用：中国，101712658〔P〕． 2010 －05 －26． 张园园，李银峰，王杰晶，等．药物中痕量磺酸酯类物质的检 测技术研究进展〔J〕． 药物评价研究，2012，35 （4）：304 EuropeanMedicines Agency． Guideline genotox-ic impurities〔S〕． CPMP/ SWP/5199 /02，EMEA/ CHMP/ QWP/ 251344 /2006． EMEA《遗传毒性杂质限度指导原则》介绍〔EB/OL〕． 〔2013 01〕．http：/ www．cde． org． cn dzkw．do？ method largePage＆id=2054． isopropylmethanesulfonate activesubstances〔S〕． European Pharmacopoeia 0，01/2012 2058，170－171． 柱前衍生高效液相色谱法测定人血浆中尿囊素浓度〔J〕． 中国新药杂志，2004，13 （5）：435 柱前衍生HPLC 法测定脾氨肽口 服液中17 种游离氨基酸〔J〕． 中国新药杂志，2013，22（11）： 1255 －1259． 〔10〕 SITAＲAM C，ＲUPAKULA ＲB，ＲEDDY BN，et al． Determination alkylmethanesulfon-ates doxazosinmesylate gaschroma- tography-mass spectrometer〔J〕． Indian PharmSci，2011，73 （1）：107 －110． 编辑：周卓/ 接受日期： 2014－03 －26 （上接第1325 本方法快速、准确、灵敏，样品前处理过程对测定无干扰，适合蛋白质类药物的定性定量研究。该 研究有效解决了凝血酶冻干粉类多组分生化药品物 质基础不明的问题，为凝血酶冻干粉质量标准中增 订血浆来源的鉴别及纯度控制等项目提供了依据， 也为同类生化药物的组分研究及确证提供思路。 国家药典委员会．中华人民共和国药典〔S〕． 2010 年版． 微生物学免疫学进展，2005，33（4）：44－48． 凝血酶研究概况〔J〕．血栓与止血 学，2009，15（3）：142 －144． 几种多组分生化药注射剂降压物质的探讨〔J〕． 中国药事，2010，24（6）：546 －549． 微血管医学与蛋白质组学〔J〕．中国微循环，2004，8 （2）：69 －71． 计算机科学与探索，2010，4（2）：97－107． DOMONB，AEBEＲSOLD considerationswhen selecting quantitativeproteomics strategy〔J〕． Nat Biotechnol， 2010，28（7）：710 －721． LIGZ，VISSEＲS JP，SILVA JC，et al． Database searching ac-counting multiplexedprecursor production spectra from dataindependent analysis complexpeptide mix- tures〔J〕． Proteomics，2009，9（6）：1696 －1719． SILVAJC，GOＲENSTEIN MV，LI GZ，et al． Absolute quantifica- tion LCMSE：avirtue parallelMS acquisition MolCell Proteomics，2006，5（1）：144 －156． 〔10〕 SILVA JC，DENNY Ｒ，DOＲSCHEL C，et al． Simultaneous quali- tative quantitativeanalysis Escherichiacoli proteome： sweettale〔J〕． Mol Cell Proteomics，2006，5（4）：589 －607． 〔11〕 蛋白质的变性〔J〕．生物学通报，2010，45（4）：23． 〔12〕 萨姆布鲁克，E． 分子克隆实验指南〔M〕． 北京：科学出版社，1992：882－888． 编辑：周卓/ 接受日期：2014 －03 －26

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参考：ChineseJournal NewDrugs 2014，23（11） 1326 中国新药杂志2014 年第23 卷第11
gc_MS法同时测定SIPI5357甲磺酸盐中3种甲磺酸酯
ChineseJournal NewDrugs 2014，23（11） 1326 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 〔作者简介〕王莉芳，女，高级工程师，主要从事新药制剂研究。联 系电话: 13831183488，E-mail: wanglifang@ csptc． com。 〔通讯作者〕 郭文敏，女，高级工程师，主要从事新药质量研究。联 系电话: 13833396197，E-mail: guowenmin@ csptc． com。 实验研究 gc-MS 法同时测定 SIPI5357 甲磺酸盐中3 种甲磺酸酯 （石药集团中奇制药技术有限公司，石家庄050035） 〔摘要〕 目的：建立同时测定SIPI5357 甲磺酸盐中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的方法。方 法：采用柱前衍生技术和gc-MS，按内标曲线法进行SIPI 5357 甲磺酸盐中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸 异丙酯的含量测定。结果：3 个杂质之间分离度均大于2． 0，线性范围为2． 99．9%，精密度 ＲSD 1%，检出限均小于0．375 ngmL 。结论：该方法简便、准确、快速，适用于SIPI 5357 甲磺酸盐质量控制和检测。 〔关键词〕 甲磺酸酯；测定；气相-质谱联用 〔中图分类号〕Ｒ927． 〔文献标志码〕A〔文章编号〕1003 －3734（2014）11 －1326 －04 Simultaneous determination threemethanesulfonates SIPI5357mesylate gc-MSWANG Li-fang，GUO Wen-min，YANG Han-yu，WANG Bing-lin （CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology Co． ，Ltd． ，Shijiazhuang 050035，China） 〔Abstract〕 Objective：To establish threemethanesulfonates SIPI5357me- sylate gc-MS．Methods：The three methanesulfonates were determined pre-columnderivation technology combined gc-MS．Ｒesults：The resolutions threemethanesulfonates were greater than Linearcali- bration curves were obtained over recoverieswere all greater than 99． 9% ＲSDsless than detectionlimits were all lower than 375ngmL Conclusion：Themethod simple，accurate，rapid，andsuitable determi-nation qualitycontrol SIPI5357mesylate． 〔Key words〕 methanesulfonate；determination；gc-MS SIPI5357 甲磺酸盐是新型多靶点抗抑郁 ，属于国家1类新药，由于SIPI5357 甲磺酸盐 合成工艺中使用了原料甲磺酸、溶剂乙醇，因此 SIPI5357 甲磺酸盐产品中有杂质甲磺酸甲酯、甲磺 酸乙酯、甲磺酸异丙酯产生可能。烷基磺酸酯作为 潜在性基因毒性杂质，严重威胁人类健康，因此需要 控制药品中磺酸酯的限度 toxicologi-cal concern，TTC）评价大部分药物的 TTC 值为遗传 毒性杂质摄入量1． μgd，按照SIPI5357 甲磺酸盐 的初步拟定最大日服用量为 80 mg 计算，SIPI5357 甲磺酸盐中含甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙 酯的总量应不得过18． 75 ppm。 参考欧洲药典8． 版《甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯在原料药中的测定》 ，采用柱前衍生 、气相色谱-质谱联用〔10〕 ，对产品可能存在 的甲磺酸酯类经柱前衍生，生成碘甲烷、碘乙烷和碘 代异丙烷后进行检测，考察 SIPI5357 甲磺酸盐及使 用甲磺酸原料生成的中间体SIPI5357-1 中基因毒性 杂质甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的残 ChineseJournal NewDrugs 2014，23（11） 1327 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 加入硫代硫酸钠防止碘离子被氧化为碘单质：CH ＲI碘离子与磺酸酯发生亲核取代生成磺酸根与碘 代烷烃。 仪器与试药 QP2010 Plus 型气相-质谱联用仪（日本岛津公 司）；Turbo Maxtrix 16 司）；交联聚乙二醇毛细管色谱柱（安捷伦科技有限公司）。 对照品：甲磺酸甲酯（J． Baker．chemical． Co． ，批号：Lu 80127，含量：98． 3%）；甲磺酸乙酯 〔阿法埃莎（天津）化学有限公司，批号：10169291， 含量：97． 0%〕；甲磺酸异丙酯（赛默飞世尔科技有 限公司，批号：A031422，含量：99． 2%）；甲磺酸丁酯 （南京强山化工科技有限公司，批号：20110809，含 量：98． 5%）。 供试品：SIPI5357 甲磺酸盐〔石药集团中奇制药 技术（石家庄）有限公司，批号：SIPI5357-1，SI- PI5357-2，SIPI5357-3〕。 无水硫酸钠、碘化钠、无水硫代硫酸钠均为分析 纯；乙腈为色谱纯；水为去离子水。 方法与结果 2080（v 衍生试剂称取120． 碘化钠和60mg 无水 硫代硫酸钠，加水溶解并稀释至100 mL，摇匀，即得。 内标溶液精密量取甲磺酸丁酯 25 25mL量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量 取50 置10mL 量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度， 摇匀，精密量取1 mL，置25 mL 量瓶中，用混合溶剂 稀释至刻度，摇匀，即得。 标准贮备液精密称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯各25 mg，置5 mL 量瓶中，加甲苯 溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取50 μL，置25 mL 量瓶中，用内标溶液稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL 含上述3 种杂质各约10 供试品溶液精密称取供试品25 mg，置20 mL 顶空瓶中，分别加内标溶液与衍生试剂各0． mL，迅速压盖密封，摇匀，即得。 系统适用性溶液取标准溶液贮备液25 加内标溶液稀释至50mL，摇匀即得。 系统适用性分别取系统适用性溶液、甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯对照品溶液及供试品溶液，照上述 方法操作，顶空进样分析，记录质谱图，见图1 内标衍生物碘代丁烷的保留时间约为5．748 min，甲 磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的衍生物碘甲 烷、碘乙烷、碘代异丙烷的保留时间分别为2． 957， 631，3．920 min，各成分峰的理论塔板数均大于 20 000，各峰之间的分离度均大于 0，符合检测要求。 线性范围精密量取标准溶液贮备液 20，250 75，5，6．25 mL，分别加内标溶液稀释制含甲磺酸 甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯系列浓度的对照溶 液；分别精密量取上述对照溶液0． mL，置20mL 顶空瓶中，加0． mL衍生试剂，迅速压盖密封，置于 平衡30min 进样分析，记录 质谱图，结果见表1。分别以甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯的浓度为横坐标（x），分别以甲磺 Chinese Journal NewDrugs 2014，23（11） 1328 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯衍生后生成碘甲烷、碘乙烷和碘代异丙烷的峰面积与内标物碘丁烷 峰面积的比值为纵坐标（y），依次绘制标准曲线，3 个杂质的线性结果见表1。甲磺酸甲酯、甲磺酸乙 酯、甲磺酸异丙酯均在2 625ngmL 范围内线性关系良好。 个杂质的线性结果成分 线性方程 线性范围甲磺酸甲酯 0700x 625ngmL 0518x 625ngmL 0127x 625ngmL 回收率精密称取已知甲磺酸甲酯、乙酯、异丙酯含量的 供试品25 mg 份，置20mL 顶空瓶中，精密量取浓 度为150，750，1． 125 ngmL －1 的标准溶液各0． mL，加入样品中，加入衍生试剂0． mL，迅速压盖密封，制成含甲磺酸甲酯、乙酯、异丙酯浓度分别为低、中、 份。照上述方法操作，记录质谱图，并计算回收率，结果表明，本方法准确可靠。 见表2。 回收率结果成分 回收率/ 低浓度中浓度 高浓度 平均值/ 甲磺酸甲酯101． 66 99． 35 99． 89 100． 甲磺酸乙酯99． 37 100． 25 98． 98 99． 53 甲磺酸异丙酯 98． 69 99． 47 100． 36 99． 51 精密度精密量取15 mgL －1 的标准溶液0． mL，置20mL 顶空瓶中，加入0． mL衍生试剂，迅速压盖密封，置 平衡30min 进样分析，记录 质谱图，测定溶剂峰的峰面积，平行测定6 份，计算 精密度，结果见表3。 精密度结果编号 24．48 20． 21 24．09 20． 47 24．31 20． 45 24．40 20． 31 24．06 20． 38 23．95 20． 52 94平均值 24． 22 20． 39 96ＲSD/ SIPI5357样品，照上述方法进行操作，测 定样品中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的 含量，平行测定6 次。结果表明，本方法重复性良 好，满足测定要求。见表4。 重复性结果编号 甲磺酸甲酯/ ngmL 甲磺酸乙酯甲磺酸异丙酯 033未检出 未检出 037未检出 未检出 036未检出 未检出 034未检出 未检出 036未检出 未检出 037未检出 未检出 平均值 定量限与检测限取线性范围测定项下最低浓度水平溶液，加内 标溶液逐级稀释后进样分析，以信噪比约为10 1时的溶液浓度作为相应甲磺酸酯的检测限，结果甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的定量 限分别为0． 037 5，0． 375 0，1． 875 ngmL ；检测限分别为0． 003 75，0． 037 5，0． 375 ngmL 。以上结果表明，甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的 定量限和检测限均远低于各杂质的控制限度，满足 测定要求。 样品测定照上述方法测定3 SIPI5357甲磺酸盐中试 产品，其甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的 含量测定结果见表5。 SIPI5357甲磺酸盐的3 个杂质检测结果 批号 甲磺酸甲酯 038未检出 未检出 SIPI5357-2 035未检出 未检出 SIPI5357-3 036未检出 未检出 甲磺酸酯类杂质具有遗传毒性，属于欧洲药品管理局（EMEA） 中明确要求药品中应严格控制的Chinese Journal NewDrugs 2014，23（11） 1329 中国新药杂志2014 年第23 卷第11 杂质，由于本研究药物为1类新药，其最终日服用量 还有待根据临床试验来确定，因此本研究根据 SI- PI5357 甲磺酸盐的初步拟定日服用量确定甲磺酸 酯类杂质限度，从而建立了对产品中甲磺酸酯类杂 质准确可控的检测方法，但本方法学中各项指标设 定范围较宽，将来剂量的调整不影响方法的使用。 本研究采用 gc-MS 和柱前衍生的方法成功地 实现了SIPI5357 甲磺酸盐合成过程中有可能产生 的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯等毒性杂 质的有效控制，对临床样品 SIPI5357 甲磺酸盐制剂 的安全性、有效性、质量可控性起到了保证作用。 因本品理化性质原因，溶解性较差，在溶剂筛选 中分别选用了甲醇、异丙醇、二氯甲烷、乙腈等溶剂。 结果表明，选用混合溶剂去离子水 芳烷醇哌啶类化合物的合成及抗抑郁活性研究〔J〕． 药学学报，2010，45（3）：324 －329． ZHENGYY，XIE P，XING LX，et al． Development practicalsynthesis triplereuptake inhibitor，（1Ｒ，2S）-SIPI 5357〔J〕． Process Ｒes Dev，2012，16：1921 －1926． 1-丁基-2-羟基芳烷哌嗪衍生物及作为抗抑郁剂应用：中国，101712658〔P〕． 2010 －05 －26． 张园园，李银峰，王杰晶，等．药物中痕量磺酸酯类物质的检 测技术研究进展〔J〕． 药物评价研究，2012，35 （4）：304 EuropeanMedicines Agency． Guideline genotox-ic impurities〔S〕． CPMP/ SWP/5199 /02，EMEA/ CHMP/ QWP/ 251344 /2006． EMEA《遗传毒性杂质限度指导原则》介绍〔EB/OL〕． 〔2013 01〕．http：/ www．cde． org． cn dzkw．do？ method largePage＆id=2054． isopropylmethanesulfonate activesubstances〔S〕． European Pharmacopoeia 0，01/2012 2058，170－171． 柱前衍生高效液相色谱法测定人血浆中尿囊素浓度〔J〕． 中国新药杂志，2004，13 （5）：435 柱前衍生HPLC 法测定脾氨肽口 服液中17 种游离氨基酸〔J〕． 中国新药杂志，2013，22（11）： 1255 －1259． 〔10〕 SITAＲAM C，ＲUPAKULA ＲB，ＲEDDY BN，et al． Determination alkylmethanesulfon-ates doxazosinmesylate gaschroma- tography-mass spectrometer〔J〕． Indian PharmSci，2011，73 （1）：107 －110． 编辑：周卓/ 接受日期： 2014－03 －26 （上接第1325 本方法快速、准确、灵敏，样品前处理过程对测定无干扰，适合蛋白质类药物的定性定量研究。该 研究有效解决了凝血酶冻干粉类多组分生化药品物 质基础不明的问题，为凝血酶冻干粉质量标准中增 订血浆来源的鉴别及纯度控制等项目提供了依据， 也为同类生化药物的组分研究及确证提供思路。 国家药典委员会．中华人民共和国药典〔S〕． 2010 年版． 微生物学免疫学进展，2005，33（4）：44－48． 凝血酶研究概况〔J〕．血栓与止血 学，2009，15（3）：142 －144． 几种多组分生化药注射剂降压物质的探讨〔J〕． 中国药事，2010，24（6）：546 －549． 微血管医学与蛋白质组学〔J〕．中国微循环，2004，8 （2）：69 －71． 计算机科学与探索，2010，4（2）：97－107． DOMONB，AEBEＲSOLD considerationswhen selecting quantitativeproteomics strategy〔J〕． Nat Biotechnol， 2010，28（7）：710 －721． LIGZ，VISSEＲS JP，SILVA JC，et al． Database searching ac-counting multiplexedprecursor production spectra from dataindependent analysis complexpeptide mix- tures〔J〕． Proteomics，2009，9（6）：1696 －1719． SILVAJC，GOＲENSTEIN MV，LI GZ，et al． Absolute quantifica- tion LCMSE：avirtue parallelMS acquisition MolCell Proteomics，2006，5（1）：144 －156． 〔10〕 SILVA JC，DENNY Ｒ，DOＲSCHEL C，et al． Simultaneous quali- tative quantitativeanalysis Escherichiacoli proteome： sweettale〔J〕． Mol Cell Proteomics，2006，5（4）：589 －607． 〔11〕 蛋白质的变性〔J〕．生物学通报，2010，45（4）：23． 〔12〕 萨姆布鲁克，E． 分子克隆实验指南〔M〕． 北京：科学出版社，1992：882－888． 编辑：周卓/ 接受日期：2014 －03 －26

应助达人

谢谢老师。
这个方法我们有安排人去做，实用性不好，耗时间，还容易污染系统。现在我个人是倾向LC或LCMS。

应助达人

老师辛苦了，多谢！

应助达人

这种极性强磺酸类物质最好是LC或LCMS做更好。GCMS往往不容易做。

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