应助达人

您测得物质是什么？色谱条件是怎么样的？

应助达人

混标有没有问题，单标一个一个的进也不出峰吗

应助达人

根据你的描述仪器大概是正常的，但是三种物质的吸收波长，灵敏度以及溶液的浓度是否一致，过于低的灵敏度或者溶液浓度也是没有风出现的

应助工程师

另外是否三种物质一起出来了呢？考虑放缓梯度延长时间试试。

应助达人

国内的文献很多都不敢恭维，从你的出发点来看，你先要能让你的标准品出峰，液相的改变的条件无非就是：流速、柱温、色谱柱（检测波长一般不调整），需要逐个单一因素的进行调整；
1.流速调整（柱温、色谱柱一致的前提下）
参考文献的流速：文献上用的标准品或检测样品的出峰时间与你做出来的出峰时间是否一致，如果不一致，适当调整流速?50%，看你的样品是否有出峰
2.柱温调整（如果有必要的情况话）
前提是文献中有提到样品会受到温度的影响，如果不受影响，基本这个参数也是不用调整的；如果受影响，参考文献的柱温调整?10℃，采用文献的流速条件。
3.色谱柱的调整
这个就调整柱子长短，C4还是C8（一般跟文献一样的填料，不同的话会增加不确定的因素），粒径的大小（把实验室有的粒径都试一下）
4.还有一个就是洗脱梯度（如果你是等度洗脱实验，那就没必要调整；如果你是梯度洗脱实验，可以适当提高洗脱的斜率，让峰更快的出来）
5.最后一个建议：建议你的标样不要混合，最好是单一的进行检测判定。
以上意见，仅供参考！